生化工艺第七章典型产品生产工艺.pptVIP

第五节 其他产品的生产工艺 在酶生产中，为了有利于菌体生长和酶的合成，也有进行变温发酵的。例如枯草杆菌AS.398中性蛋白酶生产时，培养温度必须从31℃逐渐升温至40℃，然后再降温至31℃进行培养，蛋白酶产量比不变温高66％。据报道，酶生产的温度对酶活力的稳定性有影响。例如，嗜热芽孢杆菌淀粉酶生产时，在55℃培养所产生的酶的稳定性比35℃好。 酶生产的培养温度随菌种不同而不同，同一种微生物，在不同温度下，可产生不同的酶，同一种酶也可由不同的微生物产生。例如利用芽孢杆菌刊行蛋白酶生产常采用30～37℃，而霉菌、放线菌的蛋白酶生产以28～30℃为佳。在20℃生长的低温细菌，在低温下形成蛋白酶最多。嗜热微生物在50℃左右蛋白酶产量最大。 第五节 其他产品的生产工艺 （3）pH值对酶生产的影响及控制 酶生产的适宜的pH值通常与酶反应的最适pH值相接近。但酶反应的最适pH值对某些酶来说可能是最不稳定的。在这种情况下，酶反应的最适pH值乐酶生产的合适pH值差距就较大。如黑曲霉3350酸性蛋白酶反应的最适宜pH值为2.5～3.0，而在pH=6左右培养时酸性蛋白酶产量较高。 由于酶生产受培养基pH值的影响，故可利用培养基pH值来控制酶活性。例如利用黑曲霉生产糖化酶时，除糖化酶外还有α-淀粉酶和葡萄糖苷转移酶的存在。当pH值在中性时，糖化酶的活性高，其他两种酶的活性低。其他两种酶特别是葡萄糖苷转移酶，因为它的存在严重影响葡萄糖吸收，在糖化酶生产时是必须除去的。因此将培养基pH值调节到酸性就可以使这种酶的活性降低，如pH值达到2～2.5则有利于这种酶的消除。 第五节 其他产品的生产工艺 培养基的pH值和碳氮比密切相关，因此微生物生产酶类的pH值也和碳氮比有关。例如米曲霉在碳氮比高的培养基中培养，产酸较多，pH值值下降，有利于酸性蛋白酶的生成；在碳氮比低的培养基中培养，则pH值值升高，有利于中性和碱性蛋白酶生成。由此可见，在酶生产过程中通过培养基的碳氮比来控制pH值，从而控制酶产量是很重要的。 酶生产的pH值控制，一般根据酶生产所需求的pH值确定培养基的碳氮比和初始pH值，在一定通气搅拌条件的配合下，使培养过程的pH值变化适合酶生产的要求。但是，也有在培养基中添加缓冲剂使其具有缓冲能力以维持一定pH值的；也有在培养过程中当培养液pH值过高时添加糖或淀粉来调节，pH值过低时用通氨或加大通气量来调节的。此外，也有用补料来控制培养基的碳氮比和pH值。 第五节 其他产品的生产工艺 （4）溶解氧对酶生产的影响 酶生产所用的菌体一般都是需氧微生物，培养时都需要通风搅拌，但培养基中溶氧的浓度因菌种而异。一般，通气量少对霉菌的孢子萌发和菌丝生长有利，对酶生产不利。例如米曲霉的淀粉酶生产，培养前期降低通气量则促进菌体生长而酶产量减少；通气量大则促进产酶而对菌体生长不利。又如，以栖土曲霉生产中性蛋白酶，风量大时菌丝生长较差，但酶产量是风量大时的7倍。然而并不是利用曲霉进行酶生产时产酶期的需氧量都比菌体生长期大，也有氧浓度过大而抑制酶生产的现象。例如黑曲霉的淀粉酶生产，酶生产时的需氧量为生长旺盛时菌的需氧量的30～40％。 第五节 其他产品的生产工艺 利用细菌进行酶生产时，一般培养后期的通气搅拌程度比前期剧烈，但也有例外的情况，例如枯草杆菌的α-淀粉酶生产，在对数生长期末降低通气量可促进α-淀粉酶生产。 据报道，利用霉菌进行固体培养生产蛋白酶时，CO2对孢子萌发与产酶有作用，而不利于生长，因此在孢子发芽与产酶时通入的空气中掺入CO2有利于提高酶产量。在枯草杆菌的α-淀粉酶生产中，CO2对细胞繁殖与产酶均有影响，当通入的空气中含CO28％时，α-淀粉酶活性比对照提高3倍。 第五节 其他产品的生产工艺 如培养液浓度高，通气搅拌也要加强，以利于提高溶氧。淀粉原料用α-淀粉酶处理后，培养液黏度降低有利于氧和传递，通气量可比不处理时减少。例如以黑曲老生产糖化酶时，使用α-淀粉酶处理，当玉米粉浓度为20％时，其通气量比未用α-淀粉酶处理的15％的玉米粉浓度时减少56％。 4.酶的提取技术 （1）酶提取的方法 酶提取的方法主要有盐析法和有机溶剂沉淀法。 ①盐析法 盐析中常用的中性盐有硫酸镁、硫酸铵、硫酸钠、硫酸二氢钠，其盐析蛋白酶的能力因蛋白酶种类不同而异，一般以含有阴离子的碱性盐盐析效果较好，由于硫酸铵的溶解度在低温时也相当高，故在生产上得到普遍应用。一般使各种酶盐析的剂量通过实验来确定。 第五节 其他产品的生产工艺 以中性盐盐析蛋白酶时，酶蛋白溶液的pH值对盐析的影响不大。在高盐溶液中，温度高时酶蛋白的溶解度低，故盐析时除非酶不耐热，一般不需要降低温度。如酶蛋白不耐热，一般需冷