采用色谱柱和激光光散射联用的方法表征胶原蛋白肽的分子量.pdfVIP

第33卷第1期 明胶科学与技术 V0 1．3 3．No ．1 2013年3月The Sci ence and Technol ogy of Gel at i n Ma r ．2 013． 采 用 色 谱 柱 和 激 光 光 散 射 联 用 的 方 法 表 征 胶 原 蛋 白 肽 的 分 子 量 张 兵h 王毅虎 1 王富荣2 王颖1 史京京1 马 铭1 郭燕川h + 1．中国科学院理化技术研究所 ，北京，100190 2．包头东宝生物技术股份有限公司，内蒙古，014030 摘要 ：分子量分布是胶原蛋白肽( coUa gen pol — 的来源有关，而且与它的分子量分布具有密 yp ept i de ，简写为C ) 的重要指标，与它的物 切的联系。 理化学性质及生物学活性密切相关。本文较 目前，测定胶原蛋 白多肽分子量的方法 为详细地阐述了采用色谱柱和激光光散射联 主要有 以下几种 ：( 1) 基质辅助激光解吸 电离 用( SEC．MALLS) 的方法表征胶原蛋 白肽分子 飞行时间质谱仪法( MALDI —TOF—MS) ；( 2) 聚 量的原理和方法，采用SEC．MALLS方法对蛋 丙烯酰胺凝胶 电泳法( SDS— AGE) ；( 3) 甲醛 白酶水解 明胶制备的胶原蛋白肽进行检测， 滴定法；(4) 粘度法；( 5) 柱层析一紫外检 得到 了产品的分子量分布范围、平均分子量、 测法 。 尖峰分子量及各段分子量 内组分含量等 MALDI ．TOF—MS是近年发展起来的一种 信息 。 新型软电离生物质谱，无论是在理论上还是 在设计上该方法都是十分简单和高效的。基 1 引言 质辅助激光解析电离技术( MALDI ) 的原理是 胶原蛋白多肽是从哺乳动物的皮和骨、 用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜， 海洋动物的皮 、骨、鳞、鳔等部位提取的低分 基质从激光中吸收能量传递给生物分子，而 子量蛋白质，与胶原和明胶具有相似甚至相 电离过程 中将质子转移到生物分子或从生物 同的氨基酸组成 ¨o’3 J 。胶原蛋 白肽 的分子量 分子得到质子，而使生物分子电离 的过程 ，适 较低，水解胶原蛋白行业标准QB 2732- 20 05 用于混合物及生物大分子的测定坤1。MAL- 规定水解胶原蛋 白( 胶原蛋 白肽的别称) 的分 DI - TOF．MS的准确度高达0 ．1％～0 ．01％，能 子量范围为500—200009 ／mol 。胶原蛋白多 够准确的得到产品的分子量信息。MALDI — 肽作为营养食品得到了人们的广泛关注，随 TOF是一种定性的分析方法，不能对各组分 着研究的不断深入，研究者们发现胶原蛋 白 进行定量分析，因此无法得到样品的平均分 肽 中一些特殊的氨基酸序列具有独特的生物 子量信 息。 活性和保健功效，如抗氧化活性HJ ，抗病毒活 SDS— AGE技术对于相对分子质量大于 性[ 5] ，抗高血压活性[ 61及抑制骨质疏松r 列等 100009 ／mol 的蛋 白质来说 已经El 臻完善 ，但 功效。胶原蛋 白多肽的生物活性不仅与明胶 对于分子量小于 100009 ／mol 的低分