犬上颌窦底黏膜骨原细胞的培养和成骨性能的研究.pdfVIP

第 34卷 第 3期 中山大学学报(医学科学版) Vo1．34 No．3 2013年 5月 JOURNALOFSUNYAT-SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) Mav． 2013 犬上颌窦底黏膜骨原细胞的培养和成骨性能的研究 荣 琼，朱双喜 ，陈松龄 ，黄代营，李 祥 (中山大学附属第一医院口腔科 ，广东广州510080) 摘 要：【目的】研究犬上颌窦底黏膜骨原细胞的成骨性能。方【法】取Beagle犬上颌窦底黏膜，显微镜下观察其组织学 形态。分离培养犬上颌窦底黏膜骨原细胞。流式细胞术检测一代细胞的表面抗原CD44、CD146和CD34。一代细胞经成骨诱 导培养用于研究其体外成骨性能。诱导3d、7d和 12d时分别检测其碱性磷酸酶活性，对照组细胞用基础培养基培养。诱导 16d时 ，进行 BMP一2免疫组化染色，对照组细胞经基础培养基培养。Westernblot检测诱导 0d、7d和 16d时BMP一2的表 达。诱导28d时，茜素红染色和VonKossa染色观察钙结节形成情况。二代细胞成骨诱导培养7d，与Bio—Oss复合后 ，植入裸 鼠背部皮下，观察体内成骨情况，对照组植入Bio—Oss颗粒。结【果】犬上颌窦底黏膜由上皮层、固有层、黏膜下层和骨膜层组 成，黏膜下层富含毛细血管。流式细胞术检测显示CD44和CD146阳性 ，CD34阴性。在 3d、7d和 12d时，培养细胞碱性磷酸 酶活性逐渐升高。成骨诱导培养细胞高于基础培养细胞。16d时，与基础培养基中细胞相比，经成骨诱导的细胞 BMP一2表达 增强。Westemblot检测发现诱导 0d、7d和 16d时BMP一2的表达明显，且逐渐升高。诱导培养28d时，可矿化形成明显的钙 结节。细胞与Bio—Oss复合物植入裸鼠皮下可观察到成骨现象，对照组没有成骨表现。【结论】与人上颌窦底黏膜相同，犬上颌 窦底黏膜含有骨原细胞，具有成骨能力。 关键词：上颌窦底黏膜 ；骨原细胞 ；成骨 ；动物 中图分类号 ：R782．13 文献标志码 ：A 文章编号：1672．3554(2013)03—0378—09 OsteogenicPropertyofOsteoprogenitorCeBsfrom CanineMaxillarySinusFloorM ucosa RONGQiong，ZHUShuang—xi，CHENSong—ling，HUANGDai—ying，LIXiang (DepartmentofStomatology，TheFirstAffiliatedHospital，SunYat—senUniversity，Guangzhou510080，China) Abstract：O【bjective]Toinvestigatetheosteogenesispropertyofosteoprogenitorcellsincaninemaxillarysinusfloormucosa． M【ethods】 Beaglemxaillary sinusmucosawasobtainedandthehistologicalmorphologywasobservedundermicroscope． Osteoprogenitorcellswereharvestedfrom caninemaxillarysinusfloormucosa， thencultured． CellularsurfaceantigensofCD44， CD146， andCD34atpassageoneweredeterminedbyflow cytometry． Cellsatpassageonewereculturedinosteogenicinductive medium toinvestigatetheosteogenesispropertyinvitro．Alkalinephosphataseactivitywastestedatday3，7，and12afterinduction， respectively．Cellsinthecontrolgroupwereculturedinbasalme