分子发光分析.jsp.ppt

* * 三、装置与技术 instrument and technology of CL 发光反应室 光检测器 信号放大器 显示与记录 发光反应可采用静态或流动注射的方式进行： 静态方式：用注射器分别将试剂加入到反应器中混合， 测最大光强度或总发光量；试样量小，重现性差； 流动注射方式：用蠕动泵分别将试剂连续送入混合器，定时通过测量室，连续发光，测定光强度；试样量大。 * * 内容选择： 第一节 分子荧光和磷光 molecular fluorescence and phosphorescence 第二节 分子荧光和磷光分析法 molecular fluorescence and phosphorescence analysis 第三节 化学发光分析 chemiluminescence analysis 结束 * 5. 荧光的熄灭（猝灭或淬灭） 荧光分子与溶剂分子或其它溶质分子的相互作用，引起荧光强度降低的现象称为荧光熄灭（猝灭）。导致荧光熄灭的主要类型：碰撞熄灭、氧的熄灭、自熄灭和自吸收等。 因此，在低浓度时，荧光强度与物质的浓度呈直线关系；当高浓度时，由于自熄灭和自吸收等原因，使荧光强度与分子浓度不呈线性关系。 * 内容选择 第一节 分子荧光和磷光 molecular fluorescence and phosphorescence 第二节 分子荧光和磷光分析法 molecular fluorescence and phosphorescence analysis 第三节 化学发光分析 chemiluminescence analysis * 第十二章 分子发光分析法 一、 仪器与结构流程 instrument and general process 二、 荧光分析法和应用 fluorescence analysis and application 三、 磷光分析法的应用 phosphorescence analysis and application 第二节 分子荧光与磷光分析法 molecular luminescenceanalysis molecular fluorescence and phosphorescence analysis * 日立 F－2500型分子荧光仪 * 一、仪器与结构流程 测量荧光的仪器主要由四个部分组成：激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。 特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。 单色器：选择激发光波长的第一单色器和选择发射光(测量)波长的第二单色器 光源：高压汞灯、氙弧灯及染料激光器； 检测器：光电倍增管。 * 仪器光路图 * 同步扫描技术 根据激发和发射单色器在扫描过程中彼此间所保持的关系，同步扫描可分为固定波长差（??）和固定能量差及可变波长三种； 同步扫描技术可简化光谱，谱带变窄，减少光谱重叠，提高分辨率； 如右图所示。 合适的??可减少光谱重叠；酪氨酸和色氨酸的荧光激发光谱相似，发射光谱严重重叠，但??15nm的同步光谱只显示酪氨酸特征光谱； ??60nm时，只显示色氨酸的特征光谱，实现分别测定。 * 可获得三维光谱图的仪器 可获得激发光谱与发射光谱同时变化时的荧(磷)光光谱图 * 磷光检测 荧光计上配上磷光测量附件即可对磷光进行测量。在有荧光发射的同时测量磷光。 测量方法： （1）通常借助于荧光和磷光寿命的差别，采用磷光镜的装置将荧光隔开。 （2）采用脉冲光源和可控检测及时间分辨技术。 * 二、荧光分析方法与应用fluorescence analysis and application 1. 特点 （1）灵敏度高 比紫外－－可见分光光度法高2～4个数量级； 检测下限低：0.1～0.1?g/L。 （2）选择性强 既可依据特征发射光谱，又可根据特征激发光谱； （3）试样量少 缺点：应用范围小。 * 2. 定量依据与方法 （1）定量依据 荧光强度 If正比于吸收的光强Ia和荧光量子效率? ： If = ? Ia 由朗伯－比耳定律： Ia = I0(1－10-? l c ) If = ? I0(1－10-? l c ) = ? I0(1－e-2.3? l c ) 浓度很低时，将括号内项近似处理后： If = 2.3 ? I0 ? l c = K·c * （2）定量方法 标准曲线法： 配制一系列标准浓度