天然蛋白的免疫沉淀方法.docVIP

天然蛋白的免疫沉淀方法 本方法免疫沉淀得到的天然蛋白可用于western免疫印迹或是激酶活性分析 A. 所需溶液和试剂 注意：所有溶液用反渗透去离子水（Reverse Osmosis Deionized water, RODI）或相当纯度的水配制。 20 X 磷酸盐缓冲生理盐水 （PBS）: (#9808) 配制1L 1 X PBS时，取50 ml 20 X PBS用950 ml RODI水稀释到1L，混匀。 10 X 细胞裂解液: (#9803) 配制1 L 1 X细胞裂解液时，取100 ml 细胞裂解液加950 ml RODI水稀释到1L，混匀。注意：使用前添加1 mM PMSF。 蓝色上样缓冲液（SDS上样缓冲液）：（#7722）。 配制新鲜的3 X还原性SDS上样缓冲液，在3X SDS上样缓冲液中加入十分之一的30X的还原剂（1.25M）。 蛋白A或G琼脂糖微球（用于未标记的一抗）：（处理后可以在4°C保存2星期）。按照产品说明处理。蛋白A用于兔IgG抗体的沉淀，蛋白G用于小鼠IgG抗体的沉淀。 固定有抗生物素蛋白Streptavidin的微球（用于生物素标记的抗体）: (#3419) 用前稍加震荡，每个免疫下拉反应用10 μl。 10X 激酶缓冲液:（#9802） 配制1 ml 1X激酶缓冲液时，取100 μl 10 X激酶缓冲液用900 μl RODI水稀释到1ml，