蜈蚣三七对癌细胞增值抑制作用及机理初探.pdfVIP

摘 要 背景和目的 癌症是危害人类生命和健康最严重的一类疾病，抗癌药物的研究一直 是医学研究的热点，随着分子生物学和分子药理学对肿瘤本质和作用机 制方面的阐述，中药抗肿瘤的研究水平也有了显著提高并展示出了广阔的 前景。目前虽有多种治疗方法，临床治疗肿瘤西医一般采用手术、放疗、 化疗三大疗法，疗效快捷，有五年生存率之说，但往往有明显的损伤和毒 副作用。总体而言，综合治疗是肿瘤治疗的根本原则。而中医一般采用扶 正祛邪、活血化瘀、清热解毒三大治则，讲究辨证论治，虽然对局灶的缩 小或消除效果缓慢，但能改善机体的整体条件，其在抑制、杀伤肿瘤细胞， 改善症状与体征，以及减轻放化疗不良反应等方面，都发挥着重要作用。 因此，中医药防治肿瘤将成为未来抗肿瘤研究的发展趋势，对晚期癌症患 者，可以采用中药治疗；对癌症患者身体体质无法接受放化疗者，可以选 择中药治疗；对手术，放化疗患者身体体质产生损害和毒副作用者可以用 中药提高体质，增强免疫力。研究中医药可以取各家之长，逐步走向多学 科合作的、宏观与微观相结合的现代中医药学道路。目前，祖国传统中药 在肿瘤的治疗方面己取得了令人注目的成就，大力开展中医药治疗肿瘤的 研究是一个非常有意义的探索。 蜈蚣三七提取物特点是：疗效好但毒性很小n1。过去的研究已经证 实，该提取物作用的靶器官是胸腺和肾上腺乜1，可上调胶原诱导性关节炎 小鼠外周血免疫抑制性受体CTLA-4、诱导细胞凋亡因子Fas以及调节因 子IL-1 上述因子的表达水平无显著影响；其能上调由刀豆素(ConA)诱导小鼠脾 淋巴细胞FasmRNA的表达水平，使CTLA-4mRNA水平恢复正常，蜈蚣三 七提取物是新发现的具有改善类风湿性疾病病程作用的药物。 大量的试验研究证明毛茛科银莲花属植物有较好抗癌活性，活性成分 和作用机制已经被试验证明。蜈蚣三七为银莲花属，目前我们已经从蜈蚣 三七中提取总皂苷成分，以此我们通过本次试验对其抗肿瘤作用进行研 究。 本实验以蜈蚣三七总苷、纯化蜈蚣三七总苷以及齐墩果酸三种药物， 人胚肺细胞，进行体外抗肿瘤研究，探讨中药成分或单体的作用机理。并 根据细胞毒性最小，药物剂量最佳的原则从多次实验中筛选出最佳药物浓 度剂量，为进一步研究蜈蚣三七成分的药理学毒性及开发新药提供实验基 础。 方法： 1．药物分组：本实验分为6个组，分别为蜈蚣三七总苷、纯化蜈蚣三 七总苷以及齐墩果酸，同时设立阳性药物对照组(顺铂)、DMSO组、空白 对照组(未加药组)。 HepG2细胞、HEL细胞的生长抑制率。 细胞、HEL细胞48h后的形态学变化。 4．透射电镜进行细胞超微结构观察。 5．流式细胞仪检测各组药物作用后Siha细胞的细胞周期分布和凋亡 率。 6．统计学分析。采用统计软件SPSSl5．O分析，用独立样本的t检验， x2检验对统计数据进行分析，如有差异，多组间参数两两比较采用q检 验。以a=o．05为检验水准。(1)Y轴为细胞存活率，x轴为药物浓度，制 作细胞生长曲线。(2)利用公式计算细胞48小时细胞增殖抑制率。(3)通 过EXCEL画图法做趋势线来求48小时Ic，。值。 扛}申 考口木： 1．不同浓度不同药物分组的四种药物作用于体外培养的Siha细胞、 下： 1．1 Siha细胞：纯化蜈蚣三七总苷药抑制作用最强 药最弱(IC，。=14．89ug／m1)。 1．2 Hep3B细胞：纯化蜈蚣三七总苷(IC，。=21．08ug／m1)和蜈蚣三七 总苷药(ic，。=84．10ug／m1)的抑制作用相当，齐墩果酸药最弱 (IC5。=1 9．75ug／m1)。 1．3 蚣三七总苷药次之(IC，。=89．70ug／m1)，纯化蜈蚣三七总苷药最弱 (IC5。=54．2 lug／m1)。 1．4HEL细胞：纯化蜈蚣三七总苷、蜈蚣三七总苷、齐墩果酸对HEL 细胞一直作用不明显。 2．药物作用后，S iha细胞的形态学变化。倒置显微镜下观察到： 对照组：Siha细胞贴壁生长，弥散蔓延分布，呈纺锤形或多角形， 细胞透亮，生长状态良好。 实验组：细胞相互分离，透亮度差，贴壁大量减少，体积明显缩小， 细胞缩小，可见大量细胞崩解碎片，细胞核缩小或崩解消失。 3．电镜进行细胞超微结构观察，用药后的细胞肌浆网明显扩张呈空泡 状，线粒体肿胀、结