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项目一 紫外-可见吸收光谱法及其在食品分析中的应用 【知识目标】 1、掌握物质的吸收光谱曲线和光吸收定律； 2、认知紫外-可见分光光度计的基本结构和各部件的作用； 3、熟悉紫外-可见分光光度法的实验技术，包括溶剂的选择、显色条件的选择、干扰的消除以及测定条件的选择等； 4、熟悉紫外-可见分光光度法的定性定量方法； 5、了解紫外-可见分光光度法在食品分析中的原理及实验技术。 【技能目标】 1、能正确使用紫外-可见分光光度计以及相关玻璃仪器； 2、熟悉紫外-可见分光光度计的日常维护与保养； 3、能正确配置标准溶液、绘制吸收曲线和工作曲线； 4、能根据待测样品和实验室现有条件进行最佳实验条件的选择，如显色剂用量、酸度、显色时间、干扰消除以及仪器测定条件的选择； 5、能正确进行数据记录和处理； 6、能利用紫外-可见分光光度法对食品项目进行定性和定量测定。 【项目简介】 紫外-可见吸收光谱分析是利用物质分子对紫外-可见光谱区的辐射的吸收来进行分析的一种仪器分析方法，在化学化工、生物化学、药品分析、食品检验、医疗卫生、环境保护、生命科学等各个领域和科研生产工作中都己得到了极其广泛的应用。紫外-可见分光光度计是基于紫外-可见吸收光谱分析的原理而进行工作的常规分析仪器，仪器结构是由5个基本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。 紫外-可见吸收光谱法可用于无机及有机体系，仪器灵敏度高，一般可测μg 量级或浓度为10-5 ~ 10-6 mol /L 的物质，某些条件下甚至可测ng量级或浓度为10-7 mol /L 的物质。准确度较好，一般情况下相对误差为2%~5%，若采用精密分光光度计进行测量，相对误差可达1%~2%，因此适于低含量和微量成分的测定，而不适用于中、高含量组分的测定。 采用紫外-可见吸收光谱法在测量吸光物质的吸光度时，测量准确度往往受多方面因素影响。如样品的制备、仪器波长准确度、吸收池性能、参比溶液、入射光波长、测量的吸光度范围，测量组分的浓度范围等都会对分析结果的准确度产生影响，必须加以控制。 紫外-可见分光光度计在食品检测中的应用广泛，得到越来越多的重视。仪器价格相对低廉，分析成本低，在使用过程中仪器几乎没有什么耗损。主要应用于光度测量、成分的定性和定量分析、DNA／蛋白质分析等方面。随着分析试剂的发展，化学计量学的发展，将色谱等分离分析技术与光度法联用，将进一步解决多组分测定以及复杂样品的快速测定。紫外可见分光光度计可以满足广大中小食品企业食品检测分析的需要。在紫外区进行食品中某些指标的分光光度法测定，因其简便、快捷、有效而在食品分析中占有很大比重。在可见区，因其灵敏度高、选择性好、方法灵活、适用面宽而受到越来越多的青睐。随着分析试剂的发展，尤其是具有识别能力的特效显色剂以及金属离子显色剂等的发展，使得可见区的分光光度食品分析法将可能出现一个迅速发展阶段。 【知识基础】 一、光的基本特性 （一）光的波粒二象性 光的本质是电磁辐射，光的基本特性是波粒二象性。 光具有波动性，波长（λ）、速度（C）和频率（）被称为光的三要素，三者的关系如下： (1-1) 式中，C为光速（电磁波的传播速度），光在真空中的传播速度为2.9979x1010cm/s；λ为波长，即电磁波相邻波峰间的距离，cm；为振荡频率，周/秒或赫兹（Hz）。 从量子观点看，光具有粒子性，是一种从光源射出的能量子流或者是高速（3.0×1010cm/s）移动的粒子．这种能量子也叫光量子或光子。光子能量（E）与光的频率（）成正比： (1-2) 式中，为普朗克常致，其值为6.626×10-34J·s 。 波动性和粒子性的关系可表示为： (1-3) 电磁波频率越大，波长越小，能量就越大。电磁波按频率（或波长）可分为多种波段，如图1-1所示。 图1-1 部分电磁波波谱 （二）光的存在和相互作用 单色光，既单一频率（或波长）的光。由红到紫的七色光中的每种色光并非真正意义上的单色光，它们都有相当宽的频率(或波长)范围，如波长为0.77～0.622微米范围内的光都称红光，而氦氖激光器辐射的光波单色性最好，波长为0.6328微米，可认为是一种单色光。事实上我们能看见的光大多数都是复合光。太阳光、白炽灯光和荧光灯光都是复合光凡是复合光透过三棱镜都会发生色散可见光是电磁波谱中