28个肿瘤相关基因启动子CpG岛甲基化及转录与非小细胞肺癌相关性研究.pdfVIP

28个肿瘤相关基因启动子CpG岛甲基化及转录与非小细胞肺癌相关性的研究 摘 要 实验目的：目前关于肺癌发生机制的研究主要集中于分子和细胞生物学水 平，包括抑癌基因在内的相关基因的失活在非小细胞肺癌(NSCLC)的发生发展过 程中发挥重要作用。基因的失活方式有很多，而启动子CpG岛的异常甲基化受到 越来越多的重视。最近的研究证实启动子CpG岛甲基化可能在NSCLC发生发展过 程中都发挥重要作用，并且是导致抑癌基因失活的重要机制。本实验通过检测 28个肿瘤相关基因启动子CpG岛甲基化在43例非小细胞肺癌癌组织和癌旁组织 以及10例良性肺部疾病肺组织中的发生率，探讨上述基因的甲基化与性别、年 龄、吸烟、细胞病理类型、细胞分化程度及TNM临床分期的关系，建立NSCLC较 为完整的相关基因甲基化谱，为临床早期诊断NSCLC提供理论依据。我们还在4 例肺癌细胞株检测了发生甲基化的细胞抹mRNA的转录水平，并与去甲基化的基 因对照，进一步阐明基因启动子CDG岛的甲基化与mRNA转录水平之间的关系。 实验方法：应用酚／氯仿法按常规抽提组织的基因组DNA，经过亚硫酸盐处理， 应用甲基化特异的PCR(methyl—specific 织、癌旁组织及肺部良性疾病的肺组织28个基因的甲基化发生率。将PCR产物 回收，应用腺病毒载体构建重组体导入大肠杆菌中，培养后挑选克隆测序，同时测 I 定甲基转移酶(Sss 化的状态，选择有意义的基因应用RT-PCR检测mRNA转录水平。 基化而在良性肺部疾病肺组织中无甲基化发生。这些基因在癌组织和癌旁组织的 16％，AR为23％弄n16％，p21WAF为28％年n16％，OCT6为23％；fD9％，除APC、p16INK4a 和MGMT外其余11个基因都是癌组织的甲基化率高于癌旁组织，并且在MYODl、 28个肿瘤相关基吲启动子CpG岛甲基化段转录与非小细胞舯癌相关悱的研究 18％，MYODl为41％矛D 和27％。MGMT为28％平D 27％。14个基 1％和 和44％，MGMT29％和儿％，RASSFla为26％矛fl 和56％，AR为26％署n11％，p2IWAF为32％丰n11％，OCT6为26％年n11％，其中≤65岁 吸烟史和有吸烟史两组，14个基因癌组织的甲基化率分别是E-cad为26％与 21％，DAPK为26％署n 和42％．WTl为42％署n 和33％，RAR一0为26％和29％，p73为37％$D 和29％．OCT6为16％干fl29％，其中MGMT吸烟史组甲基化率高于无吸烟史组，差异 23％，MGMT为24％ 45％，AR为33％ 和14％，p21WAF为19％并U36％，OCT6为24％年U 率高于腺癌组，但差异均未达到统计学意义。43例NSCLC按肿瘤细胞分化程度 40％芹fl 和44％，WTI为33％、33％$fl81％，CDHl3为25％、27％干fl56％，MGMT为25％、L3％和 38％，RASSFla为17％、27％和56％，RAR—B为0％、27％干fl56％，p73为L7％、27％矛U63％，All 为25％、20％干U III期其甲基化率分别是E-cad为33％、17％$n 为60％、50％和44％，CDHl3为40％、33％矛U 28个肿瘤相关摹闪启动子CpG岛甲基化及转录与非小细胞肺癌相关件的研宄 I、II、III期三组的甲基化率，均无统计学差异。从样本的甲基化系数分析，我 们发现年龄65岁组甲基化系数高于≤65岁组，有吸烟史组的甲基化系数大于无 吸烟史组，女性的甲基化系数大于男性，腺癌组的甲基化系数大于鳞癌组，TNM分 期随I、II、111分期甲基化系数而降低，但均未达到统计学差异。而在细胞分化 差组甲基化系数大于分化中等或分化好组，差异有统计学意义(pO．0