康氏抗纤颗粒抗肝纤维化大鼠疗效和机理研究.pdf

康氏抗纤颗粒抗肝纤维化大鼠疗效及机理的研究 中文摘要 康氏抗纤颗粒抗肝纤维化大鼠的疗效和机理的研究 肝纤维化是指各种致病因素引起的肝脏损害和炎症，在修复过程中导致肝脏细胞外 基质异常增多和过度沉积的病理过程。轻者称为肝纤维化，严重者使肝小叶结构改建， 假小叶及结节形成，称为肝硬化。其本质是通过细胞因子及其网络的调控，激活肝星状 细胞，导致细胞外基质各成分合成增多，而降解相对不足，两者失去动态平衡，导致细 胞外基质在肝内过度沉积而引起肝纤维化。目前多认为肝纤维化是可逆性病变，而肝硬 化则是很难或不可逆转。 肝星状细胞己被证实是肝纤维化中产生细胞问基质最主要的效应细胞。肝星状细胞 活化后，生物学性状发生很大的改变，细胞增殖，分泌细胞因子，产生胶原和胶原酶抑 制物等，这些功能状态的改变直接或间接地关系到肝纤维化的转归。因此肝星状细胞已 经成为肝纤维化研究中的重点和防治肝纤维化的重要靶点。 康氏抗纤颗粒是全国首批500名名老中医之一的康良石教授，根据其康氏疫郁理论 组成，几十年来运用于临床，取得良好的抗肝纤维化效果。进一步从动物实验及细胞， 分子水平探讨该方抗肝纤维化的疗效及作用机理有重要意义。 本研究分为整体动物实验和细胞培养实验两个部分： l整体动物实验部分： 1．1目的：观察康氏抗纤颗粒抗肝纤维化的疗效，并初步探讨其抗肝纤维化的作用 机制。 1．2方法：用复合四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型，分为正常对照组，模型对照组， 康氏抗纤颗粒大剂量组、康氏抗纤颗粒等效剂量组，干扰素组和鳖甲软肝片组。观察动 物一般状态、体重、主要脏器体重指数、肝功能、肝纤维化指标、肝组织羟脯氨酸、肝 脏病理组织学改变及用免疫组织化学法检测肝组织n一平滑肌肌动蛋白(o-SMA)及转 1(TGF—B 化生长因子B 1)的表达。 1．3结果：康氏抗纤颗粒可以提高实验动物体重，改善动物一般状态，显著改善肝 功能、降低肝纤维化指标及肝组织羟脯氨酸水平，减少肝纤维化面积，减少n—sMA及 TGF一13 1的表达。 1．4结论：康氏抗纤颗粒具有良好的抗肝纤维化作用，其机制可能与保护肝细胞， 调节胶原代谢，减少活化的肝星状细胞有关。 2细胞培养实验部分 2．1目的：观察康氏抗纤颗粒药物血清对活化的肝星状细胞(HSC)的增殖、凋亡 和细胞周期的影响，并初步探讨其可能的作用机理。 2．2方法：培养的HSC T6细胞株，加入正常大鼠血清，康氏抗纤颗粒大剂量、康 氏抗纤颗粒等效剂量，康氏抗纤颗粒小剂量，干扰素组和鳖甲软肝片药物血清共同培养。 用blTT法观察他们对HSCT6的增殖的影响，用流式细胞计数仪观察他们对HSCT6凋 亡及细胞周期的影响，用细胞免疫组化染色，病理图像分析方法观察他们对HSCT6表 中文摘要 达TGF-13 l、PDGF—b、ICAM—l、Bax、P27、CyclinE的影响。 T6的凋亡， 2．3结果：康氏抗纤颗粒药物血清可以抑制HSCT6的增殖，促进HSC 抑制HSCT6的增殖周期。康氏抗纤颗粒药物血清可以减少TGF—B 的表达，增加Bax、P27的表达。 1、 T6的增殖作用可能与其减少TGF．13 2．4结论：康氏抗纤颗粒药物血清抑制HSC T6的细胞周期的作用可能与减 ICAM．1的表达有关。康氏抗纤颗粒药物血清抑制HSC T6的凋亡 少CyclinE的表达，增加P27的表达有关。康氏抗纤颗粒药物血清促进HSC 可能与增加Bax的表达有关。 关键词：肝纤维化；大鼠；康氏抗纤