3对引物快速鉴定烟草黑胫病菌的比较研究.pdfVIP

云南农业大学学报　ＪｏｕｒｎａｌｏｆＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１４，２９（２）：１６１－１６６ ｈｔｔｐ：／／ｘｂｙｎａｕｅｄｕｃｎ ＩＳＳＮ１００４－３９０Ｘ；ＣＯＤＥＮＹＮＤＸＡＸ Ｅｍａｉｌ：ｘｂ＠ｙｎａｕｅｄｕｃｎ ＤＯＩ：１０３９６９／ｊｉｓｓｎ１００４－３９０Ｘ（ｎ）２０１４０２００３ ３对引物快速鉴定烟草黑胫病菌的比较研究 １ ２ １ ３ １ 张丽芳 ，方敦煌 ，陈海如 ，赵兴能 ，徐伟伟 （１．云南农业大学 植物保护学院，云南 昆明６５０２０１；２．云南省烟草农业科学研究院，云南 玉溪６５３１００； ３．云南省烟草公司普洱市公司，云南 普洱６６５０００） 摘要：为了对不同来源的烟草黑胫病菌 （Ｐｈｙｔｏｐｈｏｒａｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）进行快速鉴定，设计并合成了一对特异性引 物ＩＴＳ８１／ＩＴＳ８２，并与已经报道的特异性引物Ｐｎ１／Ｐｎ２和ＳＰ／ＡＰ对来自２２个不同采样点烟草黑胫病菌ＤＮＡ 进行ＰＣＲ扩增对比。结果发现特异性引物Ｐｎ１／Ｐｎ２和ＳＰ／ＡＰ对部分菌株不能扩增或扩增的条带较弱，而特异 性引ＩＴＳ８１／ＩＴＳ８２则能扩增所有的供试菌株且扩增条带清晰，这表明该引物的特异性强于其他２对。用其他 根茎病害病菌基因组ＤＮＡ、烟草黑胫病组织和病土验证发现，引物ＩＴＳ８１／ＩＴＳ８２只能对烟草黑胫病菌、病组 织、病土扩增出１条３６４ｂｐ的特异性条带，与报道的Ｐｎｉｃｏｔｉａｎａｅ序列同源性为１００％。证明该引物可适用于 不同来源烟草黑胫病菌的鉴定、不同地点烟草黑胫病害的诊断。 关键词：烟草黑胫病菌；特异性引物；ＰＣＲ；鉴定 中图分类号：Ｓ４３５７２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００４－３９０Ｘ（２０１４）０２－０１６１－０６ ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅＳｔｕｄｙｏｎＴｈｒｅｅＰａｉｒｓｏｆＳｐｅｃｉｆｉｃＰｒｉｍｅｒｓｔｏ ＲａｐｉｄｌｙＩｄｅｎｔｉｆｙＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｎｉｃｏｔｉａｎａｅ １ ２ １ ３ １ ＺＨＡＮＧＬｉｆａｎｇ，ＦＡＮＧＤｕｎｈｕａｎｇ，ＣＨＥＮＨａｉｒｕ，ＺＨＡＯＸｉｎｇｎｅｎｇ，ＸＵＷｅｉｗｅｉ （１ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５０２０１，Ｃｈｉｎａ； ２ＹｕｎｎａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＴｏｂａｃｃｏＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｙｕｘｉ６５３１００，Ｃｈｉｎａ； ３．Ｐｕ′ｅｒＢｒａｎｃｈｏｆＹｕｎｎａｎＴａｂｏｃｃｏＣｏｍｐａｎｙ，Ｐｕ′ｅｒ６６５０００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｒａｐｉｄｌｙｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｎｉｃｏｔｉａｎａｅＢｒｅｄａｄｅＨａａｎｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｏｒｉｇｉｎｓ， ａｐａｉｒｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｉｍｅｒｓＩＴＳ８１／ＩＴＳ８２ｗａｓｄｅｓｉｇｎｅｄ，ｔｈｅｎｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈＳＰ／ＡＰａｎｄＰｎ１／Ｐｎ２ｗｈｉｃｈ ｗａｓｒｅｐｏｒｔｅｄｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｉｍｅｒｓｔｏｅｘｔｒａｃｔｔｈｅＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｎｉｃｏｔｉａｎａｅＤＮＡｆｒｏｍ２２ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓａｍｐｌｉｎｇ ｐｏｉｎｔｓｂｙＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ．ＲｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｉｍｅｒｓＰｎ１／Ｐｎ２ａｎｄＳＰ／ＡＰｃｏｕｌｄｎｏｔ ａｍｐｌｉｆｙｔｈｅｓｅａｌｌ２２ｉｓｏｌａｔｅｓｏｆＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｎｉｃｏｔｉａｎａｅｏｒｔｈｅｂａｎｄｓｗｅｒｅｎｏｔｖｅｒｙｆｅｅｂｌｅ．Ｃｏｎｖｅｒｓｅｌｙ， ｔｈｅｓｐｅｃｉｆ