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腺病毒载体操作手册 腺病毒载体操作手册 一、实验流程 制备腺病毒穿梭质粒，分别高纯度无内毒素抽提腺病毒穿梭质 粒和骨架质粒，共转染293A细胞，转染后6h更换为完全培养基，培养 十几天，在中间四五天左右更换一次新鲜培养基，然后收集细胞和1ml 培液置于15ml离心管后，液氮/37度冻融三次（冻-融要彻底），2000rpm 离心5分钟，取上清即为病毒液初代原液。连续三代反复扩增收集病 毒后，行病毒的大量扩增，然后通过CsCl密度梯度离心-透析联用法 纯化病毒。 二、实验材料 （一）腺病毒载体、包装细胞和菌株 该病毒包装系统 为两质粒系统 ， 组成为 穿梭质粒 （包括 pHBAd-CMV-IRES-GFP,pHBAd-CMV-IRES-RFP,pHBAd-U6-GFP,pH BAd-U6-RFP ）和骨架质粒pBHGlox （delta ）E1,3Cre 。其中穿梭质粒 pHBAd-CMV-IRES-GFP 和 pHBAd-U6-GFP 能表达绿色荧光蛋白 （GFP ）。pHBAd-CMV-IRES-RFP 和 pHBAd-U6-RFP 能表达红色荧 光蛋白 （RF