细胞粘附调节基因CARmRNA在肝癌细胞系中的表达及苦参碱体外诱导肝癌分化的实验研究.pdf

t涌2004年浙江大学博士研究生学位谚瘦 DissertationforPh，D Yong Wang 中文摘露：第一部分 细腾糙附调节基因CARmRNA在入肝癌纲胞系审鲍表达 研究背景 细胞粘附魁生物体内普遍存在的～种重要的生命现象，参与调节多种 生理和瘸理的细胞功能。细胞粘附由多种粘附分子共同参与宪JJ芰，其形式 包括缨穗与细藏和缁魏与基矮麴粘辩两种。 近年来，由于涉及肿瘤细胞的接触抑制，细胞间涟接通讯和信号传导 弧及瓣瘸的浸澜转移，绸脆糖辩分子藏为耱癣防治镶域的又一研究热点。 目前对细胞粘附分子的研究报道较多，但多数研究仅仅停留于细胞粘 辫势子在磊发援萎手癌中袁这静梭滚，叛及表逡璧夔交纯与势瘸缎蕤拣辫浸 润的相必性研究，至于引起上述细胞粘附分子禽量及潦和力变化的具体机 秘避不漆楚。 adhesion 新逝发现的细胞粘附调节撼因(cell regulatOFgene，CAR) 先研究腔瘪细藏糖默分子蛇变他枧靠《掇供了一个毅的方自。CAR基因定位 为是一个信号转导分子，可调节整合豢奔导鲣缨照与缎胞外繁屡之瞄舱糙 附。 国外最耨研究表明，CAR蒸因在结衷肠癌和乳腺瘿等恶性肿瘤中存不 同程度的突变或缺失，且这种蹙化同肿瘤的浸润转移鬻正相关，从而认为 CAR基因有可熊是一种抑癌基网，可能通过影响细胞粘附、细胞间隙通讯 连接和髂号转导，对静瘸的生长、分化璇及澄润转移超到受向调控效应。 关于CAR基因与原发性肝癌的研究目前仅限于少数国外报道。由于CAR 蒸困辑在的染龟体16q区域农避最期搿癌时麓生等证基霹敞失躺飙窭极 高，因此CAR基冈与原发性肝癌的关系可能尤为密切。国外学者对～组30 稍覆发镶嚣手癌嫩织及稿缝的癌旁经缓、乐常翳缀织中CARmRNA进行了研究， 结果显看专所有肝癌样本中的CARmRNA表达均不同程度地低于相应的癌旁组 绫及歪鬻静缍绞。CARmRNA熬装迭量茸AFP毽、组织学努铯褥瘦、翳内转 移率、5年复发率等明腥相关。而国内尚未见CAR基因的相关报道。 本鞭究逶避RT—PCR技术，蓠次畴确了缨瞧糙辫稍繁基嚣(CAR}客咒耪 常见人肝癌细胞系中mRNA的表达情况，为进一步研究该基因的作用机制 提供理论基础。 材料和方法 肝癌细胞系，用RPMll640常规培养。 采蠲TRIzot一多法捷取翔慈芯RNA著避芎亍震量梭涮。 1 DissertationforPhD 乇涌2004年渐赶天掌持_j研究生学靛论文掣‰g Yong 分掰戈CAR 318bp，§一actin 254bp。 伸30s，CAR和Bwactin分管扩增，CAR35循环。B．aclin20循环；再 72℃蛙终延搀iomiu，PCR产虢44C绦存。 取10PCR扩增产物，以2粥琼脂糖凝胶电泳，图像扫描傈j字，用 rtl Band Leader(Vet3，00)电泳翻嫌分耩软嚣，辩电泳条带静毙密度遴嚣分褥， 结 暴 总RNA纯菠较意，箢蛋鑫质污染。经1．5％串醛交往凝胶魄溶检溺可见清 8SrRNA蘩l 糍酌1 28SrRNA两条带。表嘲RNA臻擒竞整，无裴显酶解。 PCR扩增产耪电泳显示，4种细藏禄鳓检涮翻CARmRNA寝逮。在 3I Leader