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紫外分光光度法 在药物分析中的应用 基本原理 概述：紫外-可见分光光度法是通过被测物质在紫外-可见光区的特定波长或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。 范围： Beer-Lambort 定律 仪器分类 单光束紫外可见分光光度计 准双光束紫外可见分光光度计 双光束紫外可见分光光度计 双波长紫外可见分光光度计 紫外-可见分光光谱的应用 1、在鉴别中的应用 （1）对比吸收光谱特征参数； （2）比较吸收度比值的一致性； （3）对比吸收光谱的一致性。 2、在杂质检查中的应用 3、在含量测定中的应用 （1）对照品比较法； （2）吸收系数法； （3）计算分光光度法。 1.对照品比较法 Cx=（Ax/AR）CR Cx—供试品溶液的浓度 CR—对照品溶液的浓度 Ax —供试品溶液的吸收度 AR —对照品溶液的吸收度 主要应用 利用药物与杂质对光的选择性吸收性质的差异，若药物在杂质的最大吸收波长处没有吸收，则可在此波长处测样品溶液的吸收度，通过控制样品溶液吸收度来控制杂质的量。 例：地蒽酚中二羟基蒽醌的检查 二羟基蒽醌的三氯甲烷溶液 在432nm处有最大吸收，而 地蒽酚在该处几乎无吸收。 1.判别物质的异构体，如互变异构体，顺反异构体，开链和成环异构体，旋光异构体，空间异构体等。反式异构体空间位阻小，共轭程度较完全。最大吸收峰波长，最大摩尔吸收系数，大于顺式。 2.推测物质的共轭体系和部分骨架 一般需与色谱，红外，质谱，波谱等多种仪器联合作物质的结构分析。 紫外分光光度测定方法 普通测定分光光度法 1.单组分的测定 通常采用 A-C 标准曲线法定量测定。 2.多组分的同时测定 ⑴若各组分的吸收曲线互不重叠，则可在各自最大吸收波长处分别进行测定。这本质上与单组分测定没有区别。 ⑵若各组分的吸收曲线互有重叠，则可根据吸光度的加合性求解联立方程组得出各组分的含量。 Aλ1= εaλ1bca ＋ εbλ1bcb Aλ2= εaλ2bca ＋ εbλ2bcb 差示分光光度法 普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。 即提高入射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。 设：待测溶液浓度为cx，标准溶液浓度为cs(cs cx)。则： Ax= εb cx As = εb cs ΔＡ＝Ａx －Ａs =εb(cx － cs ）=εbΔc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差ΔＡ。示差法测得的吸光度与Δc呈直线关系。由标准曲线上查得相应的Δc值，则待测溶液浓度cx ： cx = cs + Δc 双波长分光光度法 不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色光(λ1和λ2)；以参比波长λ1处的吸光度Aλ1作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。 ΔＡ＝A λ2 －A λ1 ＝（ελ2 －ελ1 ) b c 两波长处测得的吸光度差值ΔＡ与待测组分浓度成正比 （例子：课本366页） 导数分光光度法 导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析、消除背景干扰、加强光谱的精细结构以及复杂光谱的辨析等方面，显示了很大的优越性。 利用吸光度(或透光度)对波长的导数曲线来进行分析： Ｉ＝Ｉ0 e-εbc 假定入射光强度Ｉ0 在整个波长范围内保持恒定： dI 0 /dλ＝0 则：dI/dλ＝－Ｉ0 bc e -εbc dε/dλ ＝－Ｉ0 bc dε/dλ （例子：课本233页） 紫外分光光度计使用注意事项 1 仪器的校正和检定 1.1 波长 由于温度变化对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。 1．2吸收度;吸收度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。 1．3狭缝宽度 选择仪器的狭缝宽度，应以减小狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，对于《中国药典》UV法测定的大部分品种，可以使用2nm缝宽. 1．5吸收池配对 石英吸收池对紫外光亦有吸收，1em的吸收池在波长220～270nm的范围内，以空气作为100％，其透光率往往小于100％，同时每个吸收池