牡芍合剂对骨折术后疼痛模型大鼠丘脑中β-内啡肽及八肽胆囊收缩素的影响.DOCVIP

牡芍合剂对骨折术后疼痛模型大鼠丘脑中β-内啡肽及八肽胆囊收缩素的影响 作者：程烜,马小明,张敏思,游志红,姚双吉,杨雨旸 【摘要】 目的 观察牡芍合剂对骨折术后疼痛模型大鼠丘脑中β-内啡肽(β-EP)及八肽胆囊收缩素(CCK-8)的影响,探讨牡芍合剂的镇痛机理。方法 选取体重250～300 g SPF级雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组(空白组)、模型组、牡芍合剂治疗组和曲马多对照组,采用Brennan术后痛模型,术后曲马多对照组、牡芍合剂治疗组立即给药,给药后1 h处死动物取脊髓,采用放射免疫法测定β-EP及CCK-8的含量。结果 与模型组相比,牡芍合剂能显著升高术后疼痛模型大鼠丘脑中β-EP含量,并降低CCK-8的含量。结论 牡芍合剂可以促进β-EP的分泌,抑制CCK-8的分泌,起到镇痛作用。 【关键词】 牡芍合剂；术后痛模型；β-内啡肽；八肽胆囊收缩素 Key words：Mushao composition；pain after operation model；β-EP；CCK-8 创伤骨科肢体手术,特别是端肢(指)再植等显微外科手术,术后良好的镇痛可缓解骨骼肌和微小动静脉血管的痉挛,避免高凝的出现及血栓的形成,有利于手术的成功和患者的康复。近3年来,甘肃省中医院将牡芍合剂运用于骨科手术后疼痛的患者,该药治疗骨折及术后疼痛从“心”入手,通过镇静安神以调和逆乱之气血,从而达到镇痛之效果,临床取得了良好的效果。该药药效学的研究也显示,其能明显抑制醋酸引起的小鼠扭体次数,延长小鼠热刺激引起的痛反应时间。为了进一步探讨该药的镇痛机理,我们开展了该药镇痛机理的初步实验研究。 　　1 实验材料 　　1.1 药物 牡芍合剂由甘肃省中医院制剂室提供,批盐酸曲马多缓释片,华北制药集团制剂有限公司提供,批2%异氟烷,英国罗地亚精细化工有限公司产品,批号51C05A。 　　1.2 动物 SPF级Wistar大鼠,雄性,96只,体重250～300 g,甘肃中医学院科研实验中心提供,合格证号：SYXK(甘)2004-0006。 　　1.3 仪器及试剂 全自动γ免疫计数仪(FJ-2008型,西安二六二厂生产)；电子分析天平(JY4001型,上海精科公司天平仪器厂生产)；低温高速离心机(KDC-2044型,科大创新股份有限公司中佳分公司生产)；可控低温冰箱(BCD-183型,青岛奥柯玛公司生产)；β-内啡肽(β-EP)、八肽胆囊收缩素(CCK-8)放免试剂盒,第二军医大学神经生产教研室提供。 　　2 实验方法 　　2.1 分组 健康SPF级Wistar雄性大鼠32只，随机分为正常对照组、模型组、牡芍合剂治疗组和曲马多对照组,每组8只。 　　2.2 模型制备 　　采用Brennan术后痛模型。于正式实验开始前3 d,用脱毛剂(8%硫化钠)脱去大鼠左侧膝关节以下的毛。在放有脱脂棉的小烧杯中倒入10 mL的2%异氟烷,并马上将小烧杯放入标本缸,将大鼠投入,盖严标本缸,待鼠意识丧失,肌肉松弛后取出,用血管钳折断左后肢胫骨,在骨折局部用2%络合碘消毒皮肤,然后在其骨折处内侧做一手术切口,长约1 cm,依次切开皮肤、筋膜,分离肌肉直至骨面,向两侧分离肌肉,显露骨折断端,明确骨折后,将皮肤缝合一至两针,让大鼠自然苏醒。正常对照组不做处理。模型成功的标志是大鼠活动量明显减少,行走患肢不敢负重,进食量减少,出现完全提起、舔、咬被刺激肢体,毛色黯淡无光泽,经测定痛阈明显减低。 　　2.3 给药 　　正常对照组：生理盐水灌胃,剂量为5 mL/(kg·d)；模型组：生理盐水灌胃,剂量为5 mL/(kg·d)；牡芍合剂治疗组：每次牡芍合剂0.9 g/(kg·d)灌胃,每毫升牡芍合剂相当于原药材1.04 g；曲马多对照组：每次曲马多0.135 g/(kg·d)灌胃。均在术后麻醉清醒后开始灌胃给药1次。 　　2.4 指标检测 　　2.4.1 标本采集和处理 　　给药后1 h,动物在吸入2%安氟烷10 min后,迅速取出大脑,在生理盐水中煮沸5 min,称重(取下丘脑100 mg)后,置于玻璃匀浆管内,加入 1 mol/L 醋酸1 mL,在冰浴中充分匀浆后转入到塑料试管中,室温放置100 min。加入1 mol/L 氢氧化钠0.8～1 mL,中和酸。4 ℃、4 000 r/min离心20 min,取上清-20 ℃保存待测。 　　2.4.2 β-内啡肽、八肽胆囊收缩素的测定 　　采用放免法检测丘脑中β-EP、CCK-8的含量