白细胞起始黏附过程PSGL1介导信号研究.pdfVIP

起嗜中性粒细胞活化后，PSGL-1与细胞骨架结合，成为一种去垢剂不溶 的成分，而且，细胞内的F-actin产生了聚合和重新分布，伴随F-actin为 结构基础的这种细胞骨架的变化，PSGL-1发生极化，重新分布于细胞 F-actin集中的一端。细胞松弛素B的处理，消除了PSGL-1的这种极化现 象。上述实验结果提示，PSGL-1转导的信号可活化嗜中性粒细胞，诱导 F-actin骨架发生聚合和重新分布，并在F-actin骨架的指导下产生PSGL-1 分子的极化。 除了细胞质中F-actin细胞骨架发生改变是本实验观察到的一个由 PSGL-1介导的信号事件外，我们通过瞬时转染报告基因质粒、荧光素酶 活性分析及RT-PCR技术，进一步在基因转录水平检测到PSGL-1转导的 胞外信号可引起Jurkat细胞核内基因CSF-1转录的上调。 近年来，非受体酪氨酸激酶在白细胞的信号通路中的重要作用受到广 泛关注。本文研究工作中所提及的PSGL-1介导的白细胞信号中，是否也 存在酪氨酸激酶的参与?我们着重探讨了c-Abl和Syk分别在上述两种信 号事件中的作用。 我们在实验中观察道，PSGL-1抗体交联引起中性粒细胞活化后，c-Abl 重新分布并定位于F-actin集中的细胞周边或突起处，而fl,c-Abl酪氨酸 激酶特异的抑制剂 ST1571抑制了活化白细胞中F-actin的聚合和重新分 布，实验结果提示，PSGL-1抗体交联促使中性粒细胞活化过程中，c-Abl 参与了由PSGL-1到F-actn为结构基础的细胞骨架的改变这一信号通路。 此外，共转染实验结果显示，过表达Syk显著促进了抗体交联PSGL-1 引发的Jurkat细胞中CSF-1转录活性的上调。而过表达Syk激酶区突变 的共转染实验，及Syk特异性抑制剂Piceatannol对抗体交联后内源CSF-1 *ftlJ`mt}RftNi:}PAS}Gl攫1Li}-1}jC})L7JC#`6S}F}i--J1PSSihGAL}-}1fSly}kYtM`]raSA}RFM-actAnif}t}qftl4$}JT}G9,} 的细胞骨架的影响。并首次揭示了酪氨酸激酶c-Abl在这一过程中所起到 的重要作用。另外，本文工作确认了一种新的受PSGL-1信号调控的靶基 因CSF-1，并探讨了酪氨酸激酶Syk在这一信号传递通路中的参与。本文 实验结果作为新的证据进一步证实了PSGL-1是一种信号受体分子，可转 导胞外信号并引发白细胞内酪氨酸激酶参与的的信号事件。 关键词:PSGL-1，信号转导，F-actin细胞骨架，CSF-I，c-Abl,Syk ABSTRACT Therecruitmentofleukocytesrfomtheflowingbloodstreamisavery rapidprocessthatrequiresspecialmechanismsfortheestablishmentof leukocyte-endothelium contacts.Theselectinsrepresentaclassofcell adhesionmoleculesthatisspecializedforthispurpose.Selectinsandtheir ligandsmediatethecaptureofleukocytesfromthebloodstreamandrollingof leukocytesalongtheendothelialcellsurface.Thisinitialcontactisnamed rollingadhesion,whichinitiatesnotonlytherecruitmentofleukocytesto inflamedtissuebutalsothehomingandrecyclingoflymphocytes,thehoming ofhemopoieticprogenitortothemarrow,thrombopoiesis,atherosclerosis, woundhealingandtumormetastasisaswell. Selectins,anew-foundfamilyofadhesionmolecules,areC2-dependent zoo-agglutininsexpressedwithinvascularsystemandconsistofP-,L-and E-selectin.Likeallzoo-agglutinins,the