培土生金法对脾虚哮喘大鼠一氧化氮水平改变影响的实验研究.DOCVIP

临床医学论文-培土生金法对脾虚哮喘大鼠一氧化氮水平改变影响的实验研究 【摘要】? 目的：探讨培土生金法防治支气管哮喘的作用机制。方法：建立大鼠脾虚哮喘病证结合模型及单纯哮喘模型，对模型动物支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数(Tot)、嗜酸性粒细胞数(Eos)、血清和BALF上清液中一氧化氮(NO)含量的变化进行了观察。结果：两中药组Tot和Eos数以及NO含量均较相应的未用药组降低(P0.01)。结论:培土生金中药可延缓大鼠哮喘的发生，可通过降低NO含量改善NO代谢而起到一定的治疗哮喘的作用。 【关键词】? 培土生金法；脾虚证；哮喘；一氧化氮；实验研究；大鼠 ??? 依据培土生金法组方的益气定喘汤在实践中对支气管哮喘防治效果较理想。为探讨其机理，笔者建立了大鼠脾虚哮喘病证结合的模型,以动物支气管肺泡灌洗液(BALF)中总细胞数(Tot)和嗜酸粒细胞数(Eos)、血清及BALF中一氧化氮(NO)含量为观察指标,探讨培土生金法对大鼠脾虚哮喘的防治作用及其作用机制。 ??? 1? 材料与方法 ??? 1.1? 实验动物分组及造模? 健康SD大鼠(辽宁中医药大学实验动物中心提供)50只，雄性，体重120-180g，月龄4-6周。随机分为5组:病证结合(脾虚哮喘)组(A组)、病证结合中药组(A1组)、疾病(哮喘)组(B组)、疾病中药组(B1组)和正常对照组(C组以下简称“对照组”)。每组10只。将动物正常饲养3d，使之适应环境后，A组、A1组动物先行脾气虚证造模,采用饮食不节加疲劳过度综合因素伤脾的方法［1］,共8d。两组动物均出现体重下降；食量减少、水量增多；肛温略升高；大便时溏；倦怠、少动；背毛欠光泽等变化，提示造模成功。第9d,参照文献方法［2］，实验四组动物均以10%卵蛋白溶液lml腹腔注射致敏。第15d始,以1%卵蛋白溶液用超声雾化器喷雾激发。喷雾在雾化缸内任事先置于缸内的动物自行吸入。每次喷雾30s,罩内时间1min。隔日1次，共3次。正常对照组以等量生理盐水代替卵蛋白溶液，其余处理同实验组。 ??? 1.2? 中药及给药? 培土生金中药(益气定喘汤)：本方由补中益气汤合玉屏风散化裁而成，由黄芪、人参、防风等9味药按一定比例组成。常规煎煮2次,浓缩至1g生药/ml。按人鼠剂量换算，给成人等效量的10倍。于致敏后第10d开始，A1和B1组动物均以1ml中药/100g体重灌胃，日1次，共给药10d。对照组以等量生理盐水代替。 ??? 1.3? BALF液采集及处理? 喷雾激发完成后次日,各组动物均以25%乌拉坦(2.5g/kg体重)腹腔注射麻醉。待麻醉后，以5ml注射器行腹主动脉抽血，留血2ml，以1000r/min离心10min，留上清液,存放于-20℃冰箱，用于检测NO。行腹主动脉放血，切开气管，插管，用一次性注射器抽取生理盐水10ml(37℃)，缓慢注入气管内，停留1min，并缓慢抽吸出来。再重复操作2次。第2次、第3次生理盐水量分别为8ml和6ml。3次抽吸液均注入置于冰中的器皿中合并,双层无菌纱布过滤，去泡沫，取滤液，并记录各样品总量。以1000r/min离心10min,上清液存放于-20℃冰箱，用于检测NO。离心的细胞沉淀分别取1ml用血细胞计数器以Liu? Stain染色后计数Eos。 ??? 1.4? 主要仪器及试剂? DS88型自动计量仪，7151型半导体温度计，均为上海医用仪表厂生产；上海产721分光光度计(由本院附属医院放免室提供)； NO测试盒由南京建成生物工程研究所提供，NO检测采用硝酸还原酶法，按试剂盒说明书进行操作。 ??? 1.5? 统计学处理? 采用SPSS13.0统计软件包进行数据处理。采用多元方差分析，用LSD法进行均数间两两比较，结果以平均数±标准差(±s)表示。 ??? 2? 结果 ??? 2.1? 各组动物BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞计数的比较? 见表1 表1? 各组大鼠BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞计数比较 ??? 2.2? 各组动物血清及BALF中NO含量的比较? 见表2表2? 各组大鼠血清及BALF中NO含量的比较 　　3? 讨论 ??? 近年来，人们认识到哮喘是一种多种细胞、炎性介质和细胞因子介导的具有复杂免疫机制的气道慢性炎症疾患，其主要临床特征是气道的高反应(AHR)，且在缓解期依然存在［3］。AHR是哮喘重要的病理生理特征，而气道炎症是AHR形成的关键原因。嗜酸性粒细胞(Eos)在此炎症中起到极为重要的作用，在过敏性和非过敏性哮喘都以Eos浸润和激活为最终共同途径［4］。本研究结果表明，哮喘(A和B)组大鼠Tot、Eos显著升高(与C组比P＜0.01)，提示本实验哮喘大鼠存在着较严重的气道炎症，而培土生金中药处理的A1和B1两组大鼠的Tot和Eos均较相应的