小檗胺诱导白血病细胞株NB4细胞凋亡及其机制的研究.pdfVIP

鱼塑坚查堂堡主兰焦堡奎 小檗胺诱导白血病细胞株NB4细胞 凋亡及其机制研究 浙江大学医学院 血液内科学 2001级硕士研究生何智文 导 师 赵小英教授 摘 要 背 景 白血病是一种常见的血液系统恶性肿瘤，占癌症总发病数的5％。它是起源 于造血干细胞及祖细胞的恶性疾病，因其确切发病机制至今不十分明确，化疗 仍然是目前临床治疗各类型白血病的主要手段。但化疗药物产生的严重毒副作 用和肿瘤细胞对化疗药物产生耐药常会导致白血病患者治疗失败，故研制和开 发高效低毒的新型抗白血病药物己成为目前的一个主要研究内容。小檗胺及其 衍生物均为钙调素拮抗剂，是从中药中提取出的双苄基异喹啉类生物碱，临床 广泛用于治疗各种原因引起的白细胞减少症。近来有研究发现，小檗胺不仅具 有逆转白血病细胞耐药的作用，而且小檗胺也具有明显的抗肿瘤作用，研究发 现它对黑色素瘤细胞、宫颈癌细胞及白血病细胞系K562、HL60等多种细胞系 均有明显的增殖抑制作用。我们以急性早幼粒细胞系NB4为主要研究对象，进 一步探讨小檗胺抗白血病的作用及其机制。 2 雯塑坚叁兰堡主堂篁堡茎 材料与实验方法 小檗胺粉剂由抚顺中药厂惠赠，生理盐水调至工作母液浓度lmg／ml，实 72小时。人早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞由浙江大学肿瘤研究所提供。 实验共设小檗胺实验组、空白对照组及阴性对照组。实验以MTT法测定小檗胺 对N84细胞、正常骨髓细胞的增殖抑制作用，并求得其24、48、72小时半数 抑制浓度(IC。。)。形态学观察、DNA片段分析、流式细胞仪检测小檗胺对NB4 a、Survivin基因和 等检测小檗胺作用NB4细胞前后融合基因PML／RAR Caspase3的表达。 结 果 经不同浓度小檗胺处理NB4细胞不同时间后，细胞生长出现明显的抑制， 并表现出明显的时间剂量依赖性。当小檗胺浓度为8ug／ml时，其抑制率从24 抑制率从4u ug／ml时的82．5％，各组问P值均0．05， g／m1的70．6％上升至8 提示有显著性差异。小檗胺对NB4细胞作用24、48、72小时后的IC”分别为： 7．241 u u g／ml。而小檗胺对正常骨髓细胞几乎 g／m1、3．860ug／ml和2．276 没有毒性作用，当小檗胺浓度为8pg／ml时，其抑制率仅为0．307％，24小时 1．t u g／ml的小檗胺作用 IC；。为1648．342g／m1。细胞形态学观察可见，浓度为8 于NB4细胞6小时后于倒置显微镜下即可观察到NB4细胞出现细胞核浓缩， 24小时后观察可见大量的NB4细胞出现核浓缩、核碎裂及核溶解，部分碎裂 鱼塑坚奎堂堕主堂垡堡壅 的细胞核包裹于细胞膜内，形成典型的凋亡小体。琼脂糖电泳DNA片段分析可 见典型的凋亡梯形图。流式细胞仪检测发现NB4细胞凋亡率随浓度增加和作用 u 时间的延长呈现明显增加趋势，12g／ml小檗胺作用NB4细胞48小时后，调 o基因 亡率从2．83％增至58．44％。经巢式