TSP1、CD44v5与人胃癌细胞腹膜粘除附相关性的实验研究.pdfVIP

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2017-09-08 发布于浙江
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TSP1、CD44v5与人胃癌细胞腹膜粘除附相关性的实验研究.pdf

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中文摘要前言膜转移是胃癌术后最常见的复发形式，也是影响胃癌预后要的因素之一。进展期胃癌，根治性胃切除术后仍有40- 50%病人死于腹膜转移所致的癌性腹膜炎。癌细胞在腹膜上的粘附是形成癌细胞腹膜转移的关键，需多种粘附分子及细胞因子参与完成户本实验应用人胃癌细胞在腹膜粘附的体外实验方法，探讨CD44v5,TSP一1对癌细胞在腹膜粘附的影响，为临床上采取有效措施，预防腹膜转移发生提供理论依据。材验材料 (，.实验动物:BALB/C、系刁、鼠，。性，体，加、。克，。。只。 2.细胞株:BGC一823人胃癌细胞株 3.实验试剂:TSP一1单抗(购于深圳晶美公司) CD44v5单抗(购于武汉博士德公司) 唾哩蓝(MT-F) 4.实验仪器:显微镜低温离心机 96孔培养板 co,孵育箱日本Bi。一Rad公司550酶标仪 ‘1· 实验方法一、细胞培养: BGC一823人胃癌细胞株复活，细胞培养于含有5%C02的培养箱中。细胞悬液经稀释后细胞数为1.5xm/0,5l1 1.取96孔培养板，用相邻4孔，每孔加人BGC一823人胃癌细胞悬液l00ulo 2.BALB/C小鼠40只每只分别切取2x2c衬腹膜一块。 3.将邃哩兰溶于1640培养液中(5mg/ml)制成MTT液。二.本研究由两组实验组成 1.TSP一1与胃癌细胞腹膜粘附相关性实验: 分二组，每组10只小鼠。 (1)TSP一1单抗组:每孔加人TSP一1单抗l00ul，含TSP一1 单抗20ugo (2)对照组:每孔加人1640培养液l00ula 2.CD44v5与胃癌细胞腹腹粘附相关性实验: 分二组，每组10只小鼠。 (1)CD44v5单抗组:每孔加入CD44v5单抗l00ul, 含CD44v5单抗l00ugo (2)对照组:每孔加人1640培养液l00ula 三、1.将已切取好的小鼠腹膜覆盖于已添加完试剂的实验组及对照组培养板相应孔区上，每相邻4孔一块腹膜覆盖。 2.培养板倒置，3790孵育24小时;另取培养板一块，相邻4 孔，每孔加人BGC一823人胃癌细胞悬液looul(含细胞数1.5 104)，于同样条件下培养，作为空白对照组。 3.翻转培养板。 4.移去盖板，去除腹膜。 ·2 · 5.MTT法测定粘附细胞数: (1)将各试验组、对照组及空白对照组每孔加人MTT 液 100u10 (2)放置4小时，于酶标仪测定OD值，波长490nmo (3)AD%=(1一ODdetacted/ODtotal)x100%。实验结果本实验中ODtatal是未加腹膜覆盖(空白对照)的癌细胞悬液测定值，代表粘附前癌细胞悬液的细胞数，ODdetached代表未粘附的癌细胞数。经计算求出AD值，AD值代表粘附的癌细胞数。一、TSP一1与胃癌细胞腹膜粘附相关性实验中: TSP一1单抗组AD值为32.4土13.2 对照组AD值为46.3土11.1 TSP一1单抗组较对照组有显著性差异(P0.01)