CpG ODNs对肿瘤细胞端粒酶活性影响研究.pdf

ODN CpG s对肿瘤细胞端粒酶活性 影响的研究 硕士研究生：孟庆丽 指导教师：张卓然 教授 专业名称：病原生物学 摘 要 0DNs(CpG 目的CpG 的核心结构， 它可激活机体B细胞，T细胞及NK细胞等分泌IL．6、 IL一12、IFN叫等细胞因子，诱导机体整个免疫向Thl方向发展，B细胞 还同时分泌免疫球蛋白，使机体在发挥细胞免疫的同时发挥体液免 疫，因而在感染、过敏和肿瘤等疾病的防治方面发挥强大的生物学效 DNA) 应。现已证明多种细菌DNA如大肠埃希菌DNA(E．coli由于含 有大量的非甲基化CpG序列，可以调动机体免疫系统功能，因此同样 具有抗肿瘤活性。而端粒酶是细胞内的一种核酸一蛋白复合物，可在 85％-95％的肿瘤细胞中测出其活性，该酶活性的升高与肿瘤的发生发展 密切相关。多种抗肿瘤药物均可下调端粒酶活性，使肿瘤细胞通过分 0DNs及E．coli 化和凋亡等途径转归。本文旨在研究CpG DNA是否能 够引起端粒酶活性的下调，进而是否引起细胞周期的改变及凋亡的发 生。 广、 ／“k方法 ODNs和10、50、 用终浓度为l、5、109mol／L的CpG ‘ 100 i J_tg／ml的E．col 0DNs与 细胞，以MTT法检测体外抑瘤率；以终浓度为59mol／L的CpG i 终浓度为5099／ml的E．colDNA处理两种肿瘤细胞，分别收集24、 48、72和96小时的样品，用PCR—ELISA法检测肿瘤细胞端粒酶活性， 流式细胞仪检测细胞周期的改变及是否存在凋亡，用琼脂糖电泳法检测 Balb／c小鼠右腋皮下，在接种后第四天将荷瘤小鼠随机分为6组每组 lO只，5个实验组分别瘤内局部注射浓度为59mol／L的1668、2006、 DNA，对照组给以生 1825、non—CpGODN及浓度为5099Jml的E．coli 理盐水(NS)，剂量均为0．3ml，隔日一次，共8次，末次注射24小 时后，剥取肿瘤组织，测瘤重计算抑癯率，取肿瘤组织细胞悬液，以上 述方法检测肿瘤细胞的端粒酶活性，细胞周期的改变及是否存在凋亡。 结果 ODNs及E．coli 1．CpG DNA在体内外的抑瘤作用表现为： 终浓度为1、5、lOgmol／ml的CpG ODNs及终浓度为lOgg／ml的 E．coli DNA在体外均无抑瘤作用(P>O．05)，而终浓度为50、 DNA则可以在体外抑制肿瘤细胞的生长，与对照组 100pg／ml的E．coli 相比有显著性差异(P<O．05)，抑瘤率分别为：i0．512％，21．024％； DNA可以有效抑制肿 体内试验结果表明，终浓度为50肚g／ml的E．coli 瘤的生长，具有显著性(P<O．01)，抑瘤率为60．41％。 ODNs及E．coli 2．CpG DNA对肿瘤细胞端粒酶活性的作用表现 ODNs均可显著降低肿瘤细 为：1668、2006、182