ClpP蛋白酶在表皮葡萄球菌生物膜形成中作用.pdf

目录 一．论文 中文摘要………………………………………………………………… 1 英文摘要…………………………………………………………………3 OOOOOO ””“…”‘ 前言…·····……····………·………“…“…···……““O Og””一…”·5 刖舌…“””……””………………“…“…””…”““ 材料与方法 材料·…···………………………”“………一一…”““”…一””…·9 方法……………··…·…···………一····……………………·········16 第一部分ClpP蛋白酶在表皮葡萄球菌生物膜形成中的作用 引言…………………………………………………………………43 结果………………………………····”…··…·……·“···…”····…44 讨论··…··……··…·”·……”··…·“··一……………………一“·…·53 第二部分Spx蛋白对表皮葡萄球菌生物膜形成的影响 引言…………………………………………………………………57 结果…·····…………………·…·…·…··……··…”“”……………58 讨论……··…·………·………··…”…………………·…·…·…“··69 结论”·………··…………………·……“····…·……………”“””……72 参考文献…………………………………………………………………74 二．后记 发表的论文和获得的奖励………………………………………………82 致{射”·…····”·…………………………····…·…··……”…“”一……”83 ● CIpP蛋白酶在表皮葡萄球菌生物膜形成中的作用 摘要 ● 表皮葡萄球菌是重要的医院内感染病原菌，它引起的感染主要是在一些植入 人体的医疗器械表面形成生物膜，并造成持续性感染。以往报道ClpP蛋白酶在 细菌耐受应激环境、致病和形成生物膜等方面发挥作用，为了研究ClpP蛋白酶 在表皮葡萄球菌中的功能，我们构建了一株表皮葡萄球菌dpe突变菌株。与野 生菌株相比，clpP突变菌株生物膜形成能力显著下降。我们将表皮葡萄球菌clpP 基因克隆到质粒上，然后转化入clpP突变菌株，得到的基因互补菌株生物膜形 成能力回复到野生菌株的水平。我们将表皮葡萄球菌clpP基因点突变，使它编 码的蛋白失去肽酶的功能，然后将突变的clpP基因同样克隆到质粒上并转化入 clpP突变菌株，得到的菌株生物膜形成能力不能回复。这些结果表明表皮葡萄球 菌生物膜形成需要ClpP蛋白酶的功能。与野生菌株相比，clpe突变菌株对高分 子材料的粘附能力显著下降，并且细胞间粘附因子PIA的合成量减少，这两个 表型变化可能是突变菌株生物膜形成能力下降的原因。通过比较表皮葡萄球菌 agr突变菌株与野生菌株的clpP基因转录水平，我们发现ClpP受agr细菌数量 感应系统负调控。以往发现agr细菌数量感应系统对表皮葡萄球菌粘附高分子材 料的能力具有负调控作用，我们的研究结果提示agr系统有可能通过调控ClpP ◆ 而调控表皮葡