Tn5转座诱变选育冠菌素耐高温生产菌株及其发酵条件研究.pdfVIP

中国农业科技导报，2009，11(1)：62—67 JournalofAgriculturalScienceandTechnology Tn5转座诱变选育冠菌素耐高温生产菌株及其发酵条件研究 吴慧玲， 焦 睿， 章家长， 李召虎 (中国农业大学农学与生物技术学院，北京 100193) 摘 要：利用双亲接合的方法将含有Tn5转座子的质粒pRL1063a导入丁香假单胞菌大豆致病变种 (Pseudo— mollAx~syingaepv．g inea)PG4180中，在含有卡那霉素和链霉素的MG平板上筛选抗性接合子。通过诱变， 从874个突变株中筛选得到2株高温下产生冠菌素的突变株MFB132和MFB141。进而对菌株 MFB141的发 酵条件进行了优化 ，其最佳发酵条件为：2％葡萄糖为碳源 ，0．1％氯化铵为氮源，培养基初始pH为6．8，装液 量为50mL／500mL，接种量为2％，发酵温度由原来的18℃上升到28~C，而发酵时间由原来的168h缩短到 108h。在最优化条件下，出发菌株28~C下冠菌素产量仅为 1．8mg／L，而突变株MFB141在28~C下的产量达 到37．66mg／L，大约是出发菌株的21倍。 关键词：冠菌素；丁香假单胞菌；Tn5转座子 ；发酵条件 中图分类号：Q939．92 文献标识码：A 文章编号：1008~864(2009)01-0062-06 ScreeningofHighTemperatureTolerantCoronatineProducing StrainsbyTn5TransposonM utationandStudies onitsFermentation Conditions WU Hui-ling，JIAO Rui，ZHANGJia-chang，LIZhao-hu (StateKeyLaboratoryofPlantPhysiologyandBiochemistry，DepartmentofAgronomy ChinaA culturalUniversity，Beijing100193，China) Abstract：TheplasmidpRL1063acontainingTn5transposonwastransferredintoPseudomonassyingaepv．glycinea PG4180byCOnjunctionandassociatorswerescreenedonMGplateswithkanamycinandstrepmycin．Outof874 insertionmutants，twomutantswhichcouldproducecoronatineathightemperaturewereobtained．Theywerenamed asMFB132andMFB141，respectively．TheoptimalfermentationconditionsforMFB141wereasfollows：2％ glucose ascarbonsource，0．1％ NH4C1asnitrogensource，theinitialpH was6．8，medium cubagewas50mL ／5OOmL，and inoculationsizewas2％．rI11efemr entationtemperaturerosefrom original18℃ to28℃ andfermentationtimewas shortenedfrom 168hoursto108hours．ThecoronatineyieldofMFB141underoptimizedconditionreachedto37．66 mr,／Lat28℃，whichwas21timesofthatofwildtypestrain(1．8m mL)． Keywords：coronatine；Pseudomonassyringae；Tn5transposon；fermentationcondition 冠菌素(co