等电聚焦电泳-IEFE的基本原理.pptVIP

等 电 聚 焦 电 泳 Isoelectric Focusing Electrophoresis，IEFE 一、IEFE 定义 IEFE一种利用具有pH梯度的支持介质分离等点电不同的蛋白质的电泳技术。 各种蛋白质各自都有一个等电点,在一特殊的pH环境中,蛋白质分子呈电中性,在电场中不会迁移。 等电聚焦就是在电泳介质中放入载体两性电解质，当通以直流电时，两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，在此体系中，不同的蛋白质即移动到或聚焦于其相当的等电点位置上，也就是说被聚焦于一个狭的区带中，电泳技术中的等电点聚焦也称为聚焦电泳。 二、IEFE的特点 （一）优点 1.分辨率高（精密度可达0.01pH单位）， 灵敏度高（最低检出量达0.1ng）。 2.电泳区带相当狭窄。 3.重复性好。 （二）缺点 1.要求用无盐溶液，而在无盐溶液中蛋 白质可能发生沉淀。 2.样品中的成分必须停留在其pI，不适用 在pI不溶或发生变性的蛋白质。 分辨率较不连续PAGE更高，特别适合于分离分子量相同而电荷不同的生物大分子。 三、IEFE的基本原理 蛋白质分子在不同pH下的解离状态 NH3+ NH3+ NH2 P