秸秆还田土壤中细菌群落结构多样性分析及纤维素降解细菌的分离.pdfVIP

m㈣舢删删Ⅲ帅删《删删 Y2149950 摘要 本文采用传统的细菌分离培养方法和DGGE非培养方法对不同秸秆还田条件下的 土壤细菌群落多样性进行了研究。 扩增16S rRNA基因的V3可变区，结合变性梯度凝胶电泳(DGGE，den栅inggmdientgel 样性。 采集小麦／玉米秸秆还田土壤样品，通过富集培养和刚果红平板染色法筛选分离纤维 素降解细菌，通过16S rRNA基因序列的分析对分离的菌株进行初步鉴定。以未处理的玉 米秸秆为碳源，研究了氮源、发酵时问、初始发酵温度、培养基初始pH等条件对伯克氏 菌产纤维素酶条件的影响。 多样性研究结果表明，不同秸秆还田后土壤之间细菌群落结构存在较大差异，DGGE 图谱中特异性的11个条带的序列分析结果显示，其中10个条带代表的细菌是非培养细菌 (Uncultured 组，细菌群落ShaIlnon指数相对较高，细菌的多样性优于对照组，主成分分析也表明几 种秸秆还田处理的土壤与对照组的土壤相比，细菌群落多样性特征存在一定的差异。 对DGGE图谱中的主要条带序列分析结果显示，11条带分别归属于伯克氏菌属 (C印，．洒V砌岱Sp．)，泉发菌属(吼7几妒办f，fcsp．)，不动杆菌属(舶聊，，?口m纪D6口c研f“msp．)， sp．)和酸杆菌目(Acidobacteriales)。 salt]平板进行 降解秸秆纤维素的细菌的筛选，分离得到45株细菌和3株放线菌，通过进一步的筛选， 获得1株高活性纤维素降解细菌，初步鉴定其为一株伯克氏菌。筛选的纤维素降解细菌 中，菌株XWS．12具有较强的纤维素酶活，该菌株产纤维素酶最适宜的氮源为硝酸钠， 较稳定。粗酶液的热稳定较差，不同温度条件下，酶活力的变化结果表明，当温度超过 50。C，该酶活力显著下降，当温度为50。C，保温1h，酶活力损失53％。 筛选的48株纤维素分解菌纯培养并经分子鉴定，结果显示其分别属于伯克氏菌属 sp．，2株)，链微菌属(妣p幻啦ycPJ印．，2株)，链霉菌属(您∥D叼，ce5sp．，l株)，生 丝微菌属(DPvDs砌sp．，1株)，无色杆菌属(彳c办加mD6口c胞rsp．，l株)，固氮螺菌属 (么加印护f盯“m 根瘤菌科(Imizobiaceae， (肋胁8f聊D胛傩sp．，1株)，根瘤菌属(R办忍D6f“聊sp．，7株)， 3株)，根瘤菌目(Rjlizobiales，1株)和丫一变形菌纲(gammaproteobacteria，2株)。 rRNA 6S 关键词：纤维素分解菌，筛选，纤维素酶活力，变性梯度凝胶电泳(DGGE)，1 II Abstract soil、Ⅳas wittl and Inthis culture—dependent diVersi够of explored paper，bacterial memodsof were usedwithmetraditional methods．T