大鳍鳠IL-1β基因cDNA克隆及表达分析.pdf

摘要 大鳍鲮皿1∥基因cDNA克隆及表达分析． 水生生物学专业研究生：杨莹莹 指导教师：张其中教授 摘 要 B，IL．1 白细胞介素1B(int硎eul【in．1B)是白细胞介素1家族的重要成员之一。 IL．1 B作为一类促炎反应的前期细胞因子，通过介导一系列反应而诱发炎症，同 时还具有提高组织抗感染的能力。研究表明多种刺激因素都可导致鱼类IL．1B的 表达量发生变化，这预示着IL．1B可能在鱼类抵御疾病的生理过程中发挥重要作 用。大鳍鲮(蚴脚姗聊a唧胞，．姗)作为长江及珠江流域特有的经济鱼类，在养殖 过程中经常受病原菌感染而发生死亡。因此，探讨儿．J罗基因在大鳍鳢抗病反应 中表达量的变化，以期进一步阐明尼．J夕基因在鱼类抗病过程中的作用。本研究 BcDNA的基因 采用简并引物PCR、RACE和巢氏PCR法，克隆了大鳍鲮的IL．1 序列。在此基础上，运用半定量PCR方法，研究了大鳍鲮在未受刺激的情况下尼．J 夕基因的组织分布，以及在经嗜水气单胞菌(彳伽聊D凇批p办池)和脂多糖(LPS) 刺激后，儿．J∥基因的表达变化规律。主要结果如下： 7非 编码区域ⅣTR)为224bp，其中含有3个I矾A不稳定基序A1TrA(RNAinstabilit)， 7 加尾信号AATAAA。5 氨基酸。对克隆到的序列进行分析，预测的蛋白质分子量为33．84343kD，等电点 IL．1 B序列中不存在信号肽和白细胞介素．1转换酶(证terleuk珏lconv池geIlzyme， ICE)的切割位点。与斑点叉尾鲴等其他8种脊椎动物进行同源性分析发现，大鳍 鲮IL．1B氨基酸序列与斑点叉尾鲴相似性最高，为79．0％，与原鸡的相似性最低， 为22．O％。进化树分析表明，大鳍鳢IL．1B与斑点叉尾鲴聚为一支。 组织分布分析表明，尼．J夕基因在大鳍鳢各检测组织器官中呈组成型表达， 在头肾、脾脏中表达量最高，在肾、肌肉、胃、皮肤、肝脏及肠中的表达量次之， 而在脑中表达量最弱。 经嗜水气单胞菌刺激后，大鳍鲮头肾和脾脏中尼．J∥基因的表达量变化的总 体趋势相近，都是随时间先升高再下降至正常水平。注射嗜水气单胞菌4h后头肾 西南大学硕士学何论文 ‘蔓鳖量皇曼曼曼量蔓曼曼鼍量量皇曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼量曼曩舅曼皇量曼舅曼曼量量曼曼皇蔓璺曼曼量量曼曼量虽曼皇鼍皇喜皇皇量皇皇皇曼曼量 和脾脏中的表达量均开始明显增加，1d后表达量达到最高，随后表达量开始有所 降低，15d后恢复到未刺激的水平。 经LPS刺激后，大鳍鲮IL．1B的表达量变化较嗜水气单胞菌刺激更为敏感， 头肾和脾脏的表达量总体趋势都表现为先快速增加，后随着刺激时间的延长而逐 渐恢复至对照水平。注射LPS2h后头肾和脾脏中的表达量均开始明显增加，4h 后表达量达到最高，随后表达量开始下降，1d时表达量较4h时的稍有下降，3d 时的表达量较1d时的已有大幅度下降，7d时的表达量恢复到刺激前的水平。 结果表明大鳍鲮见．J夕基因对细菌及LPS的刺激反应敏感，提示该基因在机 体抵御革兰氏阴性菌引起的疾病过程中起着重要作用。 关键词：大鳍鳢；白细胞介素1B；cDNA克隆；基因表达 II Abstract Molecularand of cloning expressionanalysis th ein e儿一Z∥genA堑眇z跖s朋口c乃叩纪，彩s Yingy