家蚕耐氟基因(Def)连锁及定位分析.pdfVIP

摘 要 摘 要 我国是世界蚕业的发源地，栽桑养蚕、缫丝织绸已有5000 多年的历史。目前我国 丝绸工业年总产值达 1350 亿元，茧丝产量和出口量分别占世界总额的 70%和 80% 以 上，蚕丝业是我国少数几个既能主导国际市场、又有自主知识产权、极具中华民族特 色的优势传统产业。 家蚕氟化物耐受性是很重要的一项经济性状。氟化物是磷肥厂、砖瓦厂、玻璃厂、 水泥厂等排出的有害气体，氟化物对蚕的危害主要是通过桑叶吸收以及吸附氟化物后， 蚕儿食下污染桑叶而引起的。桑叶积累的氟化物越多，蚕食下后的毒害就越大。当桑 叶中含氟量达到30～50mg/kg(mg/kg)时，氟化物将在蚕体内积累，出现慢性中毒症状； 当桑叶中含氟量达到90～120 mg/kg 时3～4 龄蚕有58～99 ％死亡；150mg/kg 以上时 各龄蚕大都在食下2～3 天后死亡。 自20 世纪80 年代以来，随着中国经济的持续高速发展，尤其是乡镇工业的不断 发展，大气氟化物污染越来越严重，蚕儿食下受污染的桑叶而中毒的事件时有发生， 给蚕业生产带来很大危害。据报道1986 年浙江省湖州市因氟化物污染危害，受害面积 达73% ，减收春茧2900 吨。嘉兴市受害面积达45% ，损失春茧约3 万担。1995 年江 苏省淮阴县、沭阳县因氟化物危害减收300 多万元，以致于我国老蚕区浙江、江苏等 经济发达地区，为了稳定蚕茧生产在春季改饲夏秋蚕品种。如今氟化物污染地区已扩 大到江苏、浙江、广东、山东、重庆、广西等省市。为此，不少学者就氟化物对蚕的 影响进行了广泛研究。中国农业科学院蚕业研究所在调查300 多个家蚕资源品种的耐 氟性基础上，首次发现了阈值为200mg/kg 的耐氟显性主效基因。 本研究利用 SSR 分子标记及形态标记对耐氟显性主效基因(Def)进行了分子标记 连锁及定位分析，并用形态标记对Def 基因的连锁关系进行了验证。 1.分子标记连锁及定位分析 所用的亲本为中国农业科学院蚕业研究所保存的耐氟显性主效基因载体品种 T6 和氟化物敏感品种733 新，利用T6 和733 新近交系组配正反交群体(733新×T6)×733 新和733 新×(733新×T6)，分别记作BC F 和BC M，利用已经构建的家蚕SSR 分子连 1 1 锁图谱，对耐氟显性主效基因(Def)进行了分子标记连锁及定位分析。 1.1 用BC F 群体对Def 基因进行连锁分析 1 用28 条连锁群上已知的SSR 标记在亲本733 新和F1 （733 新×T6 ）之间做多态 性分析，筛选多态标记。再用筛选到的多态性标记在BC F 群中做基因型分析，寻找 1 I 摘 要 与Def 基因连锁的标记。结果在第12 连锁群上筛选出3 个与Def 基因连锁的SSR 标 记（S1202,S1214 和S1215）。为了增加标记密度，在第12 连锁群上的其它17 个已经 定位的没有多态性的SSR 标记附近设计引物，寻找与Def 基因连锁的新的SSR 标记。 结果在S1212 附近找到了一个与Def 基因连锁的新标记，新标记编号为S1212-01。这 4 个标记在BC1F 群中的所有耐氟个体表现出与（733 新×T6 ）F1 相同的杂合型带型； 而所有的敏感个体表现出与亲本733 新一致的纯合带型，说明这些标记与Def 基因连 锁，家蚕的耐氟性是由单个显性主基因控制的，且Def 基因位于12 染色体上。 1.2 利用BC M 群体构建了Def 基因的遗传连锁图 1 用筛选和获得的4 个与Def 基因连锁的SSR 标记，在BC M 群体中做PCR 扩增,通 1 过计算条带的交换率对Def 基因进行定位分析，构建了Def 基因的遗传连锁图，遗传 图距离为39.7cM，Def 基因位于35.3cM 处。在第12 染色体