流化床吸附分离蛋白质基础研究.pdf

中 文 摘 要 中文摘要 本文系统的介绍了两种新型流化床吸附技术:膨胀床和磁稳流化床，主要研究了 它们在蛋白质分离中的应用。 1测定两种常用的膨胀介质:Streamlinequartzbasematrix和6%agarosecoated stainlesssteelbeads在膨胀床中的粒径和密度分布:通过实验数据得到两个经验关 联式，可以分别用来预测Streamline介质在膨胀床中轴向粒径分布和6%agarose coatedstainlesssteelbeads的轴向密度分布; 2.考虑StreamlineDEAE在膨胀床中的轴向粒径分布，建立修正的轴向扩散模型， 对BSA在StreamlineDEAE膨胀床中的穿透行为进行拟合; 3.利用膨胀床吸附技术，直接由含GroEL高表达质粒pND5的重组大肠杆菌的破碎 液中，分离纯化得到电泳纯的GroEL蛋白。 4 以琼脂糖为壳层材料，利用油水乳化法包埋高密度的钦铁硼合金颗粒，制备得到 新型核壳型钦铁硼琼脂糖载体，通过筛分可以得到两种粒径范围的载体:系统的 研究了流速、填充高度和液相的粘度对它们在膨胀床中轴向混合程度的影响，并 且与商品化膨胀床介质StreamlineSP相比较:以溶菌酶 (lysozyme)为目标蛋白， 考察了亲和钦铁硼琼脂糖载体对lysozyme的吸附性能、动力学性质及其穿透行为， 并且对卵清蛋白溶液中的溶菌酶进行纯化。 5.以聚乙烯醇为包埋材料，通过氧化沉淀法制备具有超顺磁性的聚乙烯醇磁性载体， 以lysozyme和BSA为目标蛋白，考察聚乙烯醇磁性亲和载体对蛋白质的吸附性 能，并且可以实现对酵母破碎液中乙醇脱氢酶的纯化。 6.以琼脂为包埋材料，通过油水乳化法包埋磁性胶粒，制备得到琼脂磁性载体，考 察琼脂磁性亲和载体对BSA的吸附性能和动力学性质。 7.分别将琼脂糖磁性载体和钱铁硼琼脂糖载体用于磁稳流化床，研究了磁感应强度、 流速和不同磁性介质对磁稳流化床内混合特性的影响。 关键词:流化床、膨胀床、磁稳流化床、膨胀介质、磁性介质、生物分离 Abstract ABSTRACT Inthisarticle,EBAandMSFBtechniquesweresystematicallyreviewedandstudied forapplicationinthebioseparationinthefollowingaspects. 1.Thesizeanddensitydistributionsoftwocommercialmedia,thatis,Streamline particlesand6%agarosecoatedsteelbeads(6AS),inanexpandedbedsystemhavebeen studiedwithaglasscolumn(26mmLDJmodifiedbysideports.Themeanparticlesize oftheStreamlineorthedensityofthe6ASbeadswaswellexpressedasafunctionofthe normalizedbedheight(thatis,theratioofthedistancefrombedbottomtotheexpanded bedheight). 2.ThebreakthroughbehaviorofBSAwasmodeledbyconsideringthedispersionof theliquidandsolidphases,thediffusivemasstransportofproteintothesolidphaseand theStreamlineparticlesizedistributioninthebed.Usingindependentlydetermined parameters,themodelpredictionagreedreasonablywelltotheexperimentaldata. 3.GroELwasdirectlypurifiedfromthecelldisruptateof