花生抗黄曲霉的植物双价表达载体的构建_肖宇.docVIP

中国农学通报  2014,30(6):124-128 Chinese Agricultural Science Bulletin 花生抗黄曲霉的植物双价表达载体的构建 肖 宇 1，陈湘瑜 2，陈 华 2，陈剑洪 1，庄伟建 2 （1福建省泉州市农业科学研究所，福建泉州 362212； 2 福建省福建农林大学油料所/福建省作物分子与细胞生物学重点实验室，福州 362212）  摘 要：通过常规育种培育的抗黄曲霉品种皆表现抗性不稳定，鉴此开展通过基因工程手段以培育高抗 以及无筛选标记的转基因花生品种。几丁质酶基因 CHI 和葡聚糖酶基因 GLU 皆为广谱性的抗病基因 且具有协同增效作用。分别以 pSC1300-8-CHI 和 pSC1300-13-GLU 载体为基础，通过 PCR 技术在 CHI 基因的特异启动子 8#前端和 T-nos 末端分别加入 Nco酶切位点和 Afl酶切位点，在 GLU 基因的特异 启动子 13#前端和 T-nos 末端分别加入 Apa酶切位点和 Spe酶切位点，通过酶切、连接将上述 2 个基 因连接在抗生素自我删除载体 pLoxp 上，获得了具有抗生素自我删除选择标记的双价果种皮特异表达 载体 pLoxp-8-CHI-13-GLU。经过限制性内切酶鉴定，该植物表达载体构建成功。 关键词：果种皮特异启动子；抗黄曲霉；表达载体；抗生素自我删除 中图