黄瓜过敏性诱导反应蛋白基因_Cs_省略_R1_原核表达及其多克隆抗体制备_毛双双.docVIP

西北植物学报 ，０１４，４（ ）：８８４－０８８９ Ａｃｔａ　ｏｔ．ｏｒｅａｌ．Ｏｃｃｄｅｎｔ．ｉｎ． 　 　文章编号 ：０００－４０２５（０１４）５－０８８４－０６　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　ｄｏｉ：０．６０６ｊ．ｓｓｎ．０００－４０２５．０１４．５．８８４ 黄瓜过敏性诱导反应蛋白基因（ｓＨＩＲ１） 原核表达及其多克隆抗体制备 毛双双１，李玉红１＊ ，周　旋１，李万青１，陈菲帆１，程智慧１，陈　鹏２ （ 西北农林科技大学 园艺学院 ，陕西杨陵 ７１２１００； 西北农林科技大学 生命科学学院 ，陕西杨陵 ７１２１００） 摘 　要 ：该试验用黄瓜霜霉菌侵染黄瓜幼苗 ，并通过 ＰＣＲ 方法克隆其过敏性诱导反应蛋白 （ＨＩＲ）的基因 ＣｓＨＩＲ１， 构建原核表达载体 ｐＥＴ２８ａ－ＣｓＨＩＲ１，实 现 在 大 肠 杆 菌 （ ．ｏｌ ＢＬ２１ ＤＥ３）中 的 高 效 表 达 ；对 诱 导 表 达 的 时 间 和 ＩＰＴＧ 的浓度进行了优化 ；利用钴离子螯合层析纯化了重组蛋白并制备高效价多克隆抗血清 。结果表明 ：该黄瓜过 敏性反应诱导蛋白以包涵体的形式表达 ，最佳诱导时间和 ＩＰＴＧ 浓度分别为 ４ｈ和 ０． ｍｍｏｌ·Ｌ－１；经 纯 化 ，得 到 高纯度的分子量为 ３４ｋＤ 重组蛋白 ＣｓＨＩＲ１。 Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｌｏｔｉｎｇ显示 ＣｓＨＩＲ１的抗体具