陕西地区荷斯坦牛Mx1基因外显子多态性分析_王风巧.docVIP

第 ３５ 卷 第 ５ 期 ２０１４ 年 ５ 月 欍欍欍欍氥 科学研究  家畜生态学报 Ａｃｔａ　ｃｏｌｏｇｉｅ　ｎｉｍａｌｓ　ｏｍａｓｔｃ　  Ｖｏｌ．５Ｎｏ． Ｍａｙ２０１４ 陕西地区荷斯坦牛 Ｍｘ１基因外显子多态性分析  ＊  王风巧，党瑞华 ＊ ，黄洁萍，雷初朝，蓝贤勇，陈　宏 （西 北 农 林 科 技 大 学 动 物 科 技 学 院 ，陕 西 杨 凌 ７１２１００） ［摘 　要］　 牛 Ｍｘ１基因位于１号染色体上，含有１４个外显子，编码６４８个氨基酸。研究以３４６头 陕西地区荷斯坦牛为研究对象，根据 ＧｅｎＢａｎｋ所提供的牛 Ｍｘ１基因序列，设计１５对引物，采用混 合 ＤＮＡ 池扩增测序和 ＰＣＲ－ＲＦＬＰ的方法对牛 Ｍｘ１基因的１４个外显子进行多态性分析。结果表 明， 个 ＳＮＰｓ 分别位于外显子３（．８４３３３０Ｔ＞Ｃ，ｇ．８４３４１１Ａ＞Ｇ）、外显子４ （．８４４０４８Ｃ＞Ｔ） 和外显子７（．８５１３２５Ｔ＞Ｃ）。其中 外显子４（．８４４０４８Ｃ＞Ｔ）为同义突变 外显子３（．８４３３３０Ｔ ＞Ｃ，ｇ．８４３４１１Ａ＞Ｇ）两个位点的突变分别导致了异亮氨酸（ｅ）向苏氨酸（ｈｒ）、 氨酸 Ｇｌｕ）向精 氨酸 Ａｒｇ）的突变 外显子７（．８５１３２５Ｔ＞Ｃ）位点的突变导致亮氨酸（ｅｕ）变为脯氨酸（ｒｏ）。４个 ＳＮＰｓ位点都存在三种基因型，但纯合子的突变频率较低。４个ＳＮＰｓ位点共构建了１１种单倍型，其 中以 Ｈ６为最主要的单倍型。结果显示，陕西地区荷斯坦牛 Ｍｘ１基因存在较丰富的多态性，这将为 Ｍｘ１基因结构和功能的研究以及将来在育种实践中的应用提供基础资料。 ［关键词］　 荷 斯 坦 牛 Ｍｘ１ 基 因 ；ＮＰ；外 显 子 ；ＣＲ－ＲＦＬＰ ［中图分类号 ］　Ｓ８１１． 　 　 　 　 　 　 ［文献标识码 ］　Ａ　 　 ［文章编号 ］　１００５－５２２８（０１４）５－００１３－０５  　 　Ｍｘ（ｍｙｘｏｖｉμｓｒｅｓｓｔａｎｃｅ）基 因 是 由 Ｌｉｎｄｅｎ－  牛 的 Ｍｘ１ 基 因 位 于 １ 号 染 色 体 上 ，含 有 １５ 个 ｍａｎｎ等 ［ ］ 外显 子 ，编 码 ６４８ 个 氨 基 酸 。 目 前 关 于 牛 Ｍｘ１ 基 因 现 ，因 其 能 耐 受 对 其 它 随 机 交 配 小 白 鼠 致 死 剂 量 的 流 感 病 毒 感 染 而 命 名 为 Ｍｘ 基 因 。 Ｍｘ 蛋 白 是 一 种 由 型 （／β）和 型 （ ）干 扰 素 诱 导 产 生 具 有 ＧＴ－ ［ ］ 有１～３ 个 Ｍｘ蛋 白 的 不 同 异 构 体 ，一 般 定 位 于 核 内 或胞质中 。 Ｍｘ蛋 白 可 在 多 种 动 物 的 多 种 类 型 细 胞 中 表 达 ，对 多 种 病 毒 具 有 抗 性 ［３］。 Ｍｘ 蛋 白 已 知 对 ＲＮＡ 病 毒 ，如 流 感 病 毒 、水 疱 性 口 炎 病 毒 、托 高 土 病 毒 和 汉 坦 病 毒 等 有 抑 制 作 用 ，甚 至 对 ＤＮＡ 病 毒 也 有 一 多态性及抗病毒活性的研究主要集中在国外具有代 表 性 的 牛 品 种 上 ，Ｍｘ１ 基 因 还 包 含 ２ 个 剪 接 亚 型 ［ ］ ［ ］ ［ ］ 牛 品 种 的 Ｍｘ１ｃＤＮＡｓ中 发 现 了 １１ 个 ＳＮＰｓ，构 建 了 １１ 种 主 要 单 倍 型 ，并 在 ３－ＵＴＲ 发 现 一 个 １３ｂｐ 的 片 段 插 入／缺 失 突 变 。 另 外 ，通 过 体 外 重 组 感 染 试 验证 明 ，牛 Ｍｘ１ 基 因 具 有 抗 传 染 性 水 疱 性 口 炎 病 毒 （ＶＳ）的 活 性 ，且 不 同 的 单 碱 基 突 变 对 病 毒 抗 性 有 不 同 的 影 响 。 目 前 ，对 此 基 因 新 功 能 的 挖 掘 尚 在 不 断 研 究 中 ，例 如 是 否 和 奶 牛 的 乳 房 炎 抗 性 相 关 等 。 定 的 抑 制 作 用 ，如 乙 型 肝 炎 病 毒 ［ ］ 本 试 验 旨 在 通 过 分 析 陕 西 地 区 荷 斯 坦 牛 Ｍｘ１ 基 因 染 可 以 使 牛 Ｍｘ 基 因 的 ｍＲＮＡ 和 Ｍｘ 蛋 白 质 表 达 水 平 上 升 ［５］。 所 以 ，机 体 内 Ｍｘ 蛋 白 表 达 水 平 的 上 升 ，也 可 作 为 机 体 感 染 病 毒 的 特 殊 信 号 。 与 干 扰 素 相 比 ，Ｍｘ蛋 白 具 有 活 性 稳 定 、特 异 性 好 、半 衰 期 长 、 检 测 方 便 以 及 抗 病 毒 作 用 更 直 接 的 优 点 。 因 此 ，对 Ｍｘ