水稻P450基因Oscyp71Z2增强稻瘟病抗性的机制_李文奇_王芳权_王军_范.docVIP

中国农业科学  2014,47(13):2485-2493 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.13.001  水稻 P450 基因 Oscyp71Z2 增强稻瘟病抗性的机制  1111112  1  (1 江苏省农业科学院粮食作物研究所/国家水稻改良中心南京分中心/江苏省优质水稻工程技术研究中心，南京 210014； 2 南京农业大学植物保护学院，南京 210095)  摘要：【目的】分析水稻细胞色素P450基因Oscyp71Z2在稻瘟病抗性中的作用，并解析其介导的水稻抗稻瘟 病机制。方法】根据高抗稻瘟病转hrf1水稻NJH12表达谱结果，筛选到一个表达量高达114.6倍的细胞色素P450 基因Oscyp71Z2（NCBI登录号：Os07g0217600）。根据Oscyp71Z2全长编码区序列设计引物，以水稻模式粳稻品种 日本晴的cDNA为模板，通过PCR扩增Oscyp71Z2全长编码区序列。将所得的cDNA序列经测序后，与双元表达载 体pVec8连接，构建超量表达载体pVec8::Oscyp71Z2。采用冻融法将构建的超量表达载体pVec8::Oscyp71Z2质 粒转入农杆菌菌株EHA105，并利用农杆菌转化法获得Oscyp71Z2超表达水稻。常规PCR技术检测T4代Oscyp71Z2 超量表达水稻中选择标记基因潮霉素磷酸转移酶编码基因（hygromycinphosphotransferasegene，hph），并通 过qRT-PCR检测超量表达水稻中目的基因Oscyp71Z2的表达量。进一步对阳性超量表达水稻（T4、T5和T6）进行稻 瘟病表型鉴定，并检测植保素含量变化（T4）。【结果】RT-PCR和qRT-PCR结果显示，水稻细胞色素P450基因 Oscyp71Z2在高抗稻瘟病的转hrf1水稻中有较高的表达，与表达谱数据一致。通过生物信息学分析Oscyp71Z2全 长1554bp，含有2个细胞色素P450保守结构域，是CYP71Z2亚家族成员。将Oscyp71Z2成功连接到双元载体 pVec8，利用农杆菌介导法获得Oscyp71Z2超量表达水稻。超量表达水稻株系在各生育期、株高等性状，与非转基 因水稻日本晴基本一致。超量表达株系中Oscyp71Z2的表达量较野生型有显著升高。超量表达水稻的穗颈瘟抗 性等级维持在1—2级，表现为抗病或者中抗，而野生型水稻的穗颈瘟等级为3—4级，表现为感病，Oscyp71Z2 在水稻中超量表达显著增强了对穗颈瘟的抗性。Oscyp71Z2超量表达株系每克新鲜叶片中植保素MA和PB含量平 均是328和124ng，相对于野生型的85和42ng·g-1新鲜叶片有显著升高。Oscyp71Z2超量表达株系中涉及到植保 素MA和PB合成通路的4个关键基因的表达量较野生型有显著地升高。结论】水稻细胞色素P450基因Oscyp71Z2 通过调控植保素生物合成通路，赋予水稻稻瘟病抗性。 关键词：水稻；P450基因Oscyp71Z2；植保素；抗病性；稻瘟病 Study on Resistance Mechanism to Blast Mediated by P450 Gene Oscyp71Z2 in Rice LI Wen-qi1, WANG Fang-quan1, WANG Jun1, FAN Fang-jun1, ZHU Jin-yan1, YANG Jie1, SHAO Min2, ZHONG Wei-gong1 (1Institute of Food Crops, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences/Nanjing Branch of Chinese National Center for Rice Improvement /Jiangsu High Quality Rice RD Center, Nanjing 210014; 2College of Plant Protection, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095) Abstract:【Objective】The objective of this study is to analyze the role of cytochrome P450 gene Oscyp71Z2 in resistance to 收稿日期：2013-12-31；接受日期：2014-04-24 基金项目：国家自然科学基金、江苏省自然科学基金（B、国家科技支撑计划重大项目（2011BAD16B03）、江苏省农业自主