《胚胎干细胞的研究及其应用》课件1（34张）（苏教版选修3）.pptVIP

应有的尊重和应有的处理程序 应有的尊重指适当的尊重：在完全尊重（人）与不必尊重（如一块孤立的石头）之间：非人动物、胎儿、胚胎、尸体等。 人类胚胎用作研究必须是体外的，不能超过14天； 不用人类胚胎，重要研究的目的就不可能达到； 不是商品，不能买卖； 科学家应采取必要的行动纪念那些胚胎的贡献； 必要的程序是指专门的埋葬或活化，也应有简单庄严的仪式。 观点 理由 1.不符合伦理道德 (1)把试管婴儿当作人体零配件工厂,是对生命的不尊敬;(2)早期的生命也有活下去的权利,抛弃或杀死多余的胚胎,无异于”谋杀”;(3)有人会滥用设计试管婴儿技术,而设计婴儿性别; 2.符合伦理道德 (1)设计试管婴儿是为了救人,是救治患者的最好,最快捷的办法之一;(2)提供骨髓中造血干细胞并不会对试管婴儿造成损伤;(3)脐带血乃试管婴儿的”身外之物”. 3.中国政府的观点 中国卫生部在《体外受精----胚胎移植及其衍生技术规范》中规定,”实施体外受精----胚胎移植及其衍生技术必须获得卫生部批准证书”. 3.主要用途 (1)治疗人类的某些顽症 (2)培育出人造组织器官，用于器官移植 (3)是研究体外细胞分化的理想材料 * * ，即能持久地在未分化状态下进行无限的对称分裂即自我增殖。 ，即正常的二倍体核型。在体外保持未分化的状态 ，即使在长期体外培养之后，仍具有形成三个胚层细胞的能力，即全能性 ，如在体外长期培养的小鼠胚胎干细胞注入宿主囊胚腔内，使其与宿主囊胚的内细胞群混合，再将宿主囊胚植入假孕小鼠的子宫内。小鼠胚胎干细胞参与各种组织细胞的发育，形成嵌合体小鼠 * ，即能持久地在未分化状态下进行无限的对称分裂即自我增殖。 ，即正常的二倍体核型。在体外保持未分化的状态 ，即使在长期体外培养之后，仍具有形成三个胚层细胞的能力，即全能性 ，如在体外长期培养的小鼠胚胎干细胞注入宿主囊胚腔内，使其与宿主囊胚的内细胞群混合，再将宿主囊胚植入假孕小鼠的子宫内。小鼠胚胎干细胞参与各种组织细胞的发育，形成嵌合体小鼠 * ，采用第3~5代的小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)。第三代至第五代的MEF生长和分泌分化抑制因子等各种因子的能力最旺盛，并且含杂细胞少，比较纯净。饲养层细胞向培养液中分泌促进ES细胞的增殖和抑制ES细胞自主分化的因子，如白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor,LIF） ，故它能有效地促进胚胎干细胞增殖并维持其未分化的二倍体状态和全能性。经丝裂霉素C处理，阻断其有丝分裂，但不会马上死亡，可在体外存活一段时间并保持分泌各种因子的。制备的饲养层须是细胞连成一片，无间隙。因为MEF产生的抑制分化因子一部分分泌到培养液中，还有一部分锚定在细胞外基质上，通过与胚胎干细胞的接触而起到作用。无间隙的饲养单层保证了胚胎干细胞都能与饲养层细胞接触而达到最佳效果。制备的饲养层在5天内使用，时间过长，处理后的饲养层细胞会衰退死亡，效果下降，以致影响胚胎干细胞的生长。 体外培养人胚胎干细胞的基本原则是，最大限度地抑制分化，维持其全能性，同时促进其快速增殖及维持其正常的二倍体核型。 胚胎干细胞的体外培养条件： 1. ES细胞增殖所必须的营养物质。在胚胎干细胞的体外培养和传代中，必须添加细胞增殖所必需的蛋白质、核酸等，如胎牛血清，非必须氨基酸，各种嘌呤和嘧啶。本实验采用高糖的DMEM作为胚胎干细胞分离和培养的基础培养基。高糖的DMEM有助于囊胚的贴壁，内细胞团的增殖及胚胎干细胞集落的形成。其中添加β-巯基乙醇，可以保护细胞内酶和蛋白质中的巯基不被氧化，从而促进胚胎干细胞的贴壁及克隆形成。巯基 2.维持ES细胞的未分化状态和多能性，主要包括在培养液中加入LIF同时使用饲养层。 * * 干细胞工程 胚胎干细胞的研究及其应用 细胞是机体组成的基本单位 细胞 细胞群 组织 机体 一、什么是干细胞？ 　　　干细胞（Stem cell）即起源细胞。在细胞的分化过程中，细胞往往由于高度化分而完全失去了再分裂的能力，最终衰老死亡。机体在发展适应过程中为了弥补这一不足，保留了一部分未分化的原始细胞。 　　　因此，干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。 1.形态特征和生化特征 形态特征—圆形或椭圆形，核质比大； 生化特征—较高的端粒酶活性。 2.增殖特征 增殖的缓慢性 增殖的自稳性（区别与肿瘤细胞的本质特征） 干细胞的主要特征： 全能干细胞 多能干细胞 单能干细胞 按分化潜能 按发育状态 胚胎干细胞 成体干细胞 干细胞的分类 全能干细胞： （Totipotent stem cell） 具有形成完整个体的分化潜能。如胚胎干细胞（ES细胞） 多能干细胞： （pluripotent stem cell） 具有分化出多种细胞组织的潜能。如造血干细胞、神经干细胞。 单能干