14第十四章超敏反应性疾病的免疫学检验.ppt

第十四章 超敏反应性疾病的免疫学检验 阳性：机体已感染过结核杆菌或BCG接种成功； 强阳性：可能有活动性结核病； 阴性：机体未感染过结核分枝杆菌， 但应考虑： ①感染初期； ②老年人； ③重度结核病患者，机体处于免疫反应低下状态； ④患有其他疾病。 CIC的检测方法：按抗体分子在结合抗原后发生的 物理学和生物学特性的改变而设计。 ①PEG比浊法; ②ELISA法; ③胞法——Raji细胞法; ④抗球蛋白技术—mRF凝胶扩散试验。 ①2%PEG沉淀大分子CIC； ②4%PEG沉淀较小分子CIC； ③超过5%PEG选择性沉淀CIC的特性消失； ④温度影响极大，需进行温差校正； ⑤低密度脂蛋白使浊度增加，空腹采血； ⑥高γ球蛋白血症和标本反复冻融浊度增加。 ①灵敏度高于PEG比浊法，检测到0.1mg/L，重复性好等优点； ②C1q制品不易精制, 纯品不稳定，只能检出与补体结合的CIC。 将定量待检血清、HAHG和Raji细胞混合，使补体、CIC或HAHG与Raji细胞形成复合物，加入抗人IgG·FIC，形成Raji细胞—补体—CIC(或 HAHG)—抗人IgG· FIC复合物，检测荧光强度。 ①敏感性高(6mg/L HAHG)，实用性强； ②缺点需培养Raji细胞和同位素标记抗人IgG，操作繁琐; ③Raii细胞培养较困难，不易长期稳定保持其特性，培养条件受限。 2.技术要点 将mRF和待检血清中的CIC在琼脂凝胶中扩散，mRF—CIC结合形成沉淀现象，进行CIC定性或定量。 3.方法评价 敏感度较低100mg/L（HAHG），mRF来源受限，操作费时，难于常规应用。 不完全抗体：抗体分子较短小，只能与颗粒抗原一方相结合，不出现可见的凝集现象，但能封闭抗原决定簇，使其不能再与完全抗体结合。 抗人球蛋白试验（antiglobulin test,AGT）：将人 球蛋白注入异种动物，诱导动物产生抗人球蛋白血清 （antiglobulin serum，AGS)，AGS加入表面结合有不完全抗体的红细胞复合物中，就能出现可见的凝集现象。 凝集为阳性，表明受检血清有不完全抗体或红细胞上有相应抗原；同时具备阳性对照管凝集阴性对照管不凝集，如有不完全抗体，可将血清以作倍比稀释进行效价测定。 2 结果判断 ①在37℃水浴中，抗体吸附相应红细胞上的结合程 度，与致敏的时间、离子强度有关； ②离心速度和时间十分重要，原则应以最小的离心 力和最短的离心时间使阳性对照管出现反应为宜。 3 4 是一种极为敏感的检查不完全抗体的方法，也是RhD 检出的确证试验。操作繁杂，受试验条件影响较大。 注意事项 方法评价 血液病的检测； 鉴定血型和检查血清中不完全抗体； 有助于RhD的检出，多用于检测母体RhD抗体； 输血前交叉配血试验及其他特殊研究； 及早发现和避免新生儿溶血症的发生； 红细胞不相容的输血所产生的血型抗体进行检测。 5 返回章目录 临床意义 方法：荧光分光光度法、放射免疫分析法及酶免疫 分析法测定。 变应原刺激剂致嗜碱粒细胞释放组胺，可以检测出嗜 碱粒细胞的释放能力，变应原刺激剂可以特异性确定 变应原的类型。 类型 第五节 药物过敏筛选实验 一、组胺含量测定 BHRT是变应原刺激剂刺激纯化、洗涤后的嗜碱粒细 胞悬液而后释放化学介质组胺，通过测定组胺的量来 反映嗜碱粒细胞的释放能力。 BHRT的结果可以从细胞释放一定量的组胺所需要的 变应原浓度或在一定浓度的变应原作用下细胞所释放 定量的组胺量来表达。 实验的灵敏度高，结果可靠，但价格较高。 嗜碱粒细胞组胺释放 (basophil histamine release test，BHRT) (human basophil degranulation test，HBDT) 人嗜碱粒细胞脱颗粒试验 嗜碱粒细胞胞质中硫酸肝素颗粒可以被碱性染料(甲苯胺蓝、阿利新蓝等)染色。当嗜碱粒细胞表面结合的IgE与过敏原结合后，嗜碱粒细胞脱颗粒，则不再被染色，染色完整的细胞减少，从减少的完整细胞判断变应原引起的过敏状况。 类胰蛋白酶 类胰蛋白酶：是MC更具有选择性的标志，β类胰蛋白酶储存于分泌颗粒中，MC激活时，被释放至细胞外；α类胰蛋白酶原以酶原的形式存在，它的释放不需要MC的激活，所以它的血清水平可以反映体内MC数目。嗜碱粒细胞几乎不含类胰蛋白酶。 返回章目录 基础FEV1占预计值70%以上才能进行试验。 受试者应为哮喘患者病情稳定时或缓解期。 吸入激发物的浓度应从小到大，逐渐递增。 应备有急救器械、药品和有经验的临床医生在场。 注意事项