3.1《菊花的组织培养OK.pptVIP

一、植物组织培养 （1）过程总结？ （2）原理？ 5、无菌技术 培养基灭菌（高压蒸汽灭菌）、器械工具等灭菌 外植体消毒（既要考虑药剂的消毒效果，又要考虑植物的耐受能力） 接种过程保证无菌等 * 专题3 课题1 菊花的组织培养 人参的愈伤组织 菠萝的愈伤组织 二、影响植物组织培养的因素 （1）植物材料的选择 不同的植物材料难易不同： 烟草和胡萝卜的组织培养较为容易 枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 同一植物材料的年龄、保存时间的长短会 影响实验结果 菊花的组织培养一般选择未开花植株的 茎上部新萌生的侧枝 （2）营养（常用MS培养基） MS培养基主要成分（P82）： 无机物 有机物 无机盐（大量元素、微量元素） 水 蔗糖（提供营养、维持渗透压） 甘氨酸、维生素、烟酸等（特殊营养物质） 你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？ 微生物培养基以有机营养为主。 MS培养基则需提供大量无机营养。 无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素 和微量元素两大类。 配制好的MS培养基中，常添加植物激素 ①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素 （有时有赤霉素) 生长素类： 2，4－D、IAA、IBA 、NAA 细胞分裂素类： KT、BA、ZT 赤霉素类： GA3 3、植物激素的影响 菊花的茎段组织培养容易， 也可以不加激素 ②生长素和细胞分裂素作用 植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势 分化频率高 同时使用 细胞既分裂也分化 先使用细胞分裂素后使用生长素 有利于细胞分裂，但不利分化 先使用生长素，后使用细胞分裂素 实验结果 使用顺序 生长素 细胞分裂素： 有利于根的分化 生长素 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑制根的分化 生长素 细胞分裂素： ＝ 促进愈伤组织生长 ③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例对植物细胞发育方向的影响 4、pH、温度、光照 pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每日用日光灯照射12h 4、环境条件的影响 pH、温度、光照等 pH控制在5.8左右， 温度控制在18－22℃, 每日用日光灯照射12h 3、植物组织培养过程: 离体组织或细胞 植物体 脱分化 细胞分裂素≈生长素 愈伤组织 芽 根 细胞分裂素生长素 细胞分裂素生长素 再分化 植物细胞培养 二、实验操作 （一）制备MS固体培养基 MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4。C保存配制好的培养基母液来制备 1、配置各种母液 ①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存 ②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液 ③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量 2、配置培养基 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml ① 配制培养液 ② 调PH ③培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素 3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌 1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 （二）外植体消毒 2、消毒 ①流水冲洗 菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右 ② 酒精处理 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗 ③消毒液处理 取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液 （三）接种 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟 1、接种室消毒 2、无菌操作要求 操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。 3、材料的切取和接种 * * *