基因突变及菌种选育课件.pptVIP

低温保藏方法（3-6月） 石蜡油低温保藏（1-2年） 沙土管保藏法（1-10年） 液氮保藏方法（20年以上） 真空冷冻干燥法（5-15年以上） 菌 种 保 藏 菌种保藏主要是根据菌种的生理、生化特性，人工创造条件使菌体的代谢活动处于休眠状态。 * 几种常用菌种保藏方法的比较 方法名称 主要措施 适宜菌种 保藏期 评价 冰箱保藏法（斜面） 冰箱保藏法（半固体） 石蜡油封藏法 沙土保藏法 冷冻干燥法 低温 低温 低温、缺氧 干燥、无营养 干燥、无氧、低温、有保护剂 各大类 细菌、酵母菌 各大类 产孢子微生物 各大类 3~6月 6~12月 1~2年 1~10年 5~15年以上 简便 简便 简便 简便有效 简便有效 * 多歧管冷冻干燥机 液氮罐 * 中国微生物菌种保藏管理委员会(CCCCM) 美国的典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 法国里昂巴斯德研究所（IPL） 国内外菌种保藏机构： * * 呋喃糖酰胺 (furylfuramide) aflatoxin黄曲霉素 aminofluorene氨基芴 “U”型管实验（ Bernard Davis，1950 ） 证实接合过程需要细胞间的直接接触 U形管中间的滤板，允许培养基的营养物质通过，但细菌无法通过。 * F因子（F质粒/致育因子） 1、性状—含F质粒菌株，有1-4根性菌毛； 2、特点—F因子可游离于细胞内，也可插入或整合到染色体上（附加体）； 3、F因子的分子量通常为5×107，上面有编码细菌产生性菌毛（sex pili）及控制接合过程进行的20多个基因。 * * 4、F因子的四种细胞形式 根据细胞中是否存在F因子以及其存在方式的不 同，把E.coli分成四种菌株。 ①F－菌株：不含F因子，没有性菌毛，但可以通过接合作用接收F因子而变成雄性菌株（F+）； ②F＋菌株： F因子独立存在，细胞表面有性菌毛。 ③Hfr（高频重组）菌株：F因子插入到染色体DNA上，细胞表面有性菌毛。 ④F’菌株：Hfr菌株内的F因子因不正常切割而脱离染色体时，形成游离的但携带一小段染色体基因的F因子，称为F′因子。细胞表面同样有性菌毛。 * F－、 F＋、 Hfr、 F′菌株之间的关系 * （1） F＋×F－杂交 杂交的结果：供体细胞和受体细胞均成为F＋细胞，即： F＋×F－＝ F＋＋F＋ F＋菌株的F因子向F-细胞转移，但含F因子的宿主细胞的染色体DNA一般不被转移。 5、接合机制 * * Hfr菌株的F因子插入到染色体DNA上，因此只要发生接合转移过程，就可以把部分甚至全部细菌染色体传递给F-细胞并发生重组，由此而得名为高频重组菌株。 Hfr+F-→Hfr+(F-) （2）Hfr ×F－杂交 * * Hfr菌株仍然保持着F＋细胞的特征，具有性菌毛，并象F＋一样与F－细胞进行接合。所不同的是，F因子的先导区（leading region）结合着染色体DNA向受体细胞转移，F因子除先导区以外，其余绝大部分是处于转移染色体的末端，由于转移过程常被中断，因此F因子不易转入受体细胞中，故Hfr×F－杂交后的受体细胞（或接合子）大多数仍然是F－。 * * 中断杂交实验及染色体图的绘制 * 携带F′因子的菌株称初生F′菌株。 F′×F－与F＋×F－的不同：供体的部分染色体基因随F′一起转入受体细胞。 ① 与染色体发生重组； ② 继续存在于F′因子上，形成部分二倍体 （次生F′菌株）； （3） F′×F－杂交 * * 三、转导（transduction） 通过完全或部分缺陷噬菌体为媒介，将供体菌的 DNA片段携带到受体细胞，通过交换与整合，从而 使受体菌获得供体菌的部分遗传性状。 细菌转导的类型 普遍性转导 局限性转导 完全转导 流产转导 高频转导 低频转导 * 普遍性转导 由转导噬菌体携带了供体菌基因组中的任何一部分染色体片段，当它感染受体菌时，使后者获得了这部分遗传性状的现象。 * 完全转导 完全缺陷噬菌体将DNA小片段从供体菌转移到受体菌，并发生基因重组。 媒介—烈性或温和噬菌体 过程 烈性/温和性噬菌体 宿主菌（供体菌） 增殖 （在装配时，偶尔出现错误装配，即噬菌体的蛋白衣壳包装有大小与噬菌体DNA相近的宿主DNA片段） 转导噬菌体 供体菌裂解，释放出噬菌体（正常噬菌体+缺陷噬菌体（10-6,完全缺陷）） 感染受体菌 转导噬菌体释放出供体菌DNA，与染色体基因重组 * 完全普遍转导的过程 误包