19 酶工程.pptVIP

第十四章 酶技术(工程) 第一节 概述 生物技术从内容上分：基因工程、酶工程、发酵工程、蛋白工程及细胞工程。 酶工程（技术）：环绕酶所具有的生物催化功能，大规模生产并在工业、农业、医疗、食品等行业中的应用技术。 化学酶工程：(酶学+化学工程技术) 利用化学工程手段，改善酶的性能，提高催化 效率,降低成本。包括：天然酶、化学修饰酶、 固定化酶、模拟酶 生物酶工程：(酶学+现代分子生物学技术) 以 DNA重组技术为核心 。 包括：克隆酶、突变酶等。 第二节 酶的生产——酶工程上游 现代生产的酶制剂大都来自微生物体的发酵。 一、菌种的分离与选育: （1）从自然界中直接筛选 （2）用物理或化学方法诱变: 物理射线，化学诱变剂 （3）基因重组和细胞融合 二、 菌种的培养： 固体 (用曲培养) ; 液体深层发酵 第三节 酶的分离纯化 一、 酶的粗提: 胞内酶 →菌体→破碎→粗提液 胞外酶 →发酵液→盐析、沉淀→粗品 → 脱色 → 浓缩→酶液 喷雾干燥→酶粉 →工业用酶 二 酶与蛋白质的纯化 （一） 蛋白质与酶的沉淀技术： （1） 盐析法(salting-out)： (NH4)2SO4 ， NaCl LogS=LogS0 - Ks?I S，S0 ：分别是蛋白在盐溶液及纯溶剂中的溶解度 KS ：盐析常数 ; I：离子强度 1 I = 2 ∑CZ2 C：离子浓度 ； Z：离子的价数 可通过改变中性盐浓度来降低蛋白质溶解度，使 蛋白沉淀。利用蛋白溶解度差异，可把所需酶或 粗蛋白分步析出——分段盐析 盐析分级分离的经验公式： 0oC时，硫酸铵浓度由饱和度S1增加到S2，应该向1升溶液添加的固体硫酸铵克数(w）： 饱和度：给定条件下可能达到的最大浓度的百分数 0oC时，饱和硫酸铵（饱和度为100%)溶液中硫酸铵的 克数为：505g/ 1000ml溶液 固体硫酸铵的偏微比容 = 0.565ml/g （S1? 505 ) ? 1000 + w =（S2? 505 ) ? (1000+0.565w) 1000 1000 w = 505 ( S2 - S1） 1 - 0.285S2 脱盐技术： 透析除盐; 分子筛柱层析：sephadexG-25，G-50 （2）低温有机溶剂沉淀法 　　用与水可混溶的有机溶剂，甲醇，乙醇或丙酮，可使多数蛋白质溶解度降低并析出，此法分辨力比盐析高，但蛋白质较易变性，应在低温(-40-60oC)下进行。 （3）加入特定的沉淀剂： 核酸沉淀剂：氯化锰、链霉素、硫酸鱼精蛋白 杂蛋白或多糖：醋酸铅、单宁酸、SDS等，也可除多糖，沉淀后应迅速盐析除去沉淀剂，以免目的蛋白变性。 （二） 层析技术（chromatography) ： 1 吸附层析(adsorption chromatography)： 原理：在特定条件下利用吸附剂将蛋白或酶吸附上去，待除去杂质后，再改变条件使酶解吸。 常用的吸附剂： 活性炭：吸附色素、除嗅等 羟基磷灰石：蛋白在低盐溶液中吸附；高盐溶液分步 洗脱，分辨率高。