染色质体外组装相关蛋白的表达纯化及组装体系的建立.pdfVIP

医学研究杂志 2012年1月 第41卷 第1期 ·论 善 · 染色质体外组装相关蛋 白的表达纯化及 组装体系的建立 赵忠亮 赵 吉成 代 辉 沈翊绯 张 业 摘 要 目的 提取并纯化真核细胞核 内组蛋 白，表达并纯化重组组蛋 白、染色质组装相关因子 NAP一1(nuclearassembly protein一1)及ACF(ATP—utilizingchromatinassemblyandremodelingfactor)，并建立无细胞体外染色质组装体系。方法 在大肠 杆菌 BL21中表达并应用离子交换层析纯化组蛋 白，从真核细胞 HeLa细胞核 中提取并应用羟基磷灰石纯化组蛋 白八聚体 ，利用 杆状病毒表达系统在昆虫细胞 Sf9中表达并纯化组装相关因子 ，应用纯化得到的蛋 白在适宜条件下进行染色质体外组装 ，并用 微球菌核酸酶酶切检测 。结果 获得 了高纯度 的原核表达 的组蛋 白，真核细胞组蛋 白八聚体及组蛋 白特异伴侣 NAP一1和 ACF；建立 了由质粒 DNA、纯化的真核细胞核 内重组组蛋 白、