肺腺癌肿瘤标志物初步筛选及鉴定.pdfVIP

摘 要 1、背景与目的 肺癌是呼吸系统最为常见的恶性肿瘤，绝大多数为支气管粘膜上皮恶变形成，故可 以称为支气管肺癌。肺癌的病理类型包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌两大类，其中非小 细胞肺癌占所有肺癌的80％以上，又可分为腺癌，鳞癌，大细胞癌，鳞腺癌等几种类型。 近年来肺腺癌发病率在迅速增长，发病年龄也趋向年轻化，以女性多见。因肺腺癌细胞 的生物学特性与其他恶性肿瘤基本一致，既可向支气管腔内、临近肺组织及其它器官浸 润生长。亦可通过淋巴、血行等途径转移扩散，所以大部分患者发现时已为晚期，失去 了手术机会，远期生存率较低。肺腺癌的传统治疗方法为手术、化疗、放疗相结合的综 合治疗，但并没有有效地提高总的五年生存率。临床研究表明：被诊断出的早期肺腺癌， 进行以手术为主结合放化疗的治疗，其五年生存率可高达90％。而已经发生转移的肺腺 癌，因不能进行手术治疗，其生存率大大降低。 目前临床中肺腺癌主要的诊断方法有影像学、实验室生化检查、病理学等手段，但 仍然有很大一部肺腺癌患者不能被早期确诊。因此，寻找肺腺癌特异性肿瘤标志物，提 高其早期诊断率是目前亟待解决的关键问题。本研究联合双向凝胶电泳技术和质谱技术 建立了肺腺癌组织及配对癌旁组织的2-DE图谱，并对两者蛋白质表达的差异进行分析， 进而寻找有诊断价值的相关蛋白。 2、方法 首先，刮取手术切除后新鲜的肺腺癌组织及距肿瘤5cm以上的癌旁组织18例。刮 取时尽可能的去除可辨别的问质成分，以得到较纯净的肿瘤细胞和癌旁肺组织细胞。在 低温状态下，将取得的标本用无菌生理盐水反复冲洗，以去除血液成分，处理后的样品 置于一80℃冰箱保存。并在低温下裂解组织标本，匀浆，离心后取上清得组织总蛋白。 其次，应用双向凝胶电泳(2-DE)对肺腺癌组织、配对癌旁组织进行蛋白质组学比 2DPlatiRum 较研究，获得两者的双向凝胶电泳图谱后，经过ImageMaster 5．0软件对 双向凝胶电泳图谱进行分析，找到肺腺癌组织及配对癌旁组织具有最著差异的蛋白点。 挖取部分冠著差异的蛋白点后经酶解，将所得肽段经基质辅助激光解析电离飞行时IHJ质 3、结果 (1)获得了分辨率高、重复性好的双向凝胶电泳银染图谱，每块双向凝胶电泳银染 图谱的平均蛋白点数分别为1232±56和1158±71； Master2DPlatinum (2)Image 5．0软件对图谱分析后，获得差异大于3倍的蛋 白点63个，其中12个点仅在肺腺癌组织中高表达，5个点仅在配对癌旁组织中高表达； 质谱鉴定，其中11个蛋白点被成功鉴定。除去冗余，实际只鉴定出5种蛋白质，并获 4、结论 本实验结果结合文献报道，排除实验系统误差和个体差异因素外，其中23KD一白蛋 白是未能完全去除组织标本的血液成分所致。凝溶胶蛋白(钙结合微管蛋白、Gelsolin)、 Rab一14)、 S100钙结合蛋白(S100一A11)、Ras相关蛋白Rab一14(Ras—related protein 起到了相应的作用，其可能参与了肺腺癌细胞的侵袭转移、信号调节、分化、增殖、分 泌、周期活动等。这4种差异蛋白可作为肺腺癌的候选肿瘤标志物，也为筛选肺腺癌的 早期诊断、治疗及预后评估的肿瘤标志物奠定了基础。 关键词：肺腺癌，蛋白质组学，双向凝胶电泳，肿瘤标志物，差异蛋白 Abstract 1 and Background0bjective canceristhemostcommonmal tumorof the ofitis Lung ignant breathingsystem，andmajority couldcalledbronchialcanc