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细胞工程学讲义： 第一章 细胞工程概论 细胞工程概念 一、细胞工程概念及现状 细胞工程（cell engineering）是指应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的理论与方法，按照人们的需要和设计，在细胞水平上的遗传操作，重组细胞的结构和内含物，以改变生物的结构和功能，即通过细胞融合、核质移植、染色体或基因移以及组织和细胞培养等方法，快速繁殖和培养出人们所需要的的生物工程技术。细胞工程的优势在于避免了分离、提纯、剪切、拼接等基因操作，只需将细胞遗传物质直接转移到受体细胞中就能够形成杂交细胞，因而能够提高基因的转移效率。通俗地讲，细胞工程是在细胞水平上动手术，也称细胞操作技术。包括细胞融合技术、细胞器移植、染色体工程和组织培养技术。1975年Milstein和konler将小鼠骨髓瘤细胞与羊红血球免疫过的小鼠淋巴细胞融合形成杂种细胞能分泌抗羊红血球抗体，用于制备单克隆抗体。由于这一创新性工作，他们获得了1984年诺贝尔生理和医学奖。1997年2月23日，英国罗斯林研究所的试验室里诞生了一条取名为多莉的小羊。多莉的诞生，意味着人类可以利用动物的一个组织细胞，像翻录磁带或复印文件一样，大量产出相同的生命体，这无疑是基因工程研究领域的一大突破。人们剪下植物枝条，扦插到土里，不久就会发芽，长出新的植株，这些植株是遗传物质组成完全相同的植株，这就是克隆，即独立细胞繁殖系，指后代完全由一个细胞复制具有完全相同的遗传物质染色体工程是按照预先的设计，添加、消除或替代同种或异种染色体的全部或一部分，从而达到定向改变生物遗传性状或选育新品种的目的。他是从染色体水平改变细胞遗传组成的细胞工程技术。目前主要应用于植物遗传育种领域。干细胞工程是在细胞培养技术的基础上发展起来的一项新的细胞工程。它是利用干细胞的增殖特性，多分化潜能及其增殖分化的高度有序性，通过体外培养干细胞、诱导干细胞定向分化或利用转基因技术处理干细胞以改变其特性的方法，以达到利用干细胞为人类服务的目的。其主要研究内容一方面是胚胎干细胞的研究，如建立ES细胞系并利用ES细胞的发育多能性即环境因素对细胞分化发育的影响，定向诱导细胞分化为特定的细胞如肌细胞、神经细胞等作为细胞移植的新来源。另一方面成体干细胞的研究主要包括成体组织干细胞的分离培养体内和植入体内，更新机体病变的组织器官恢复正常功能；并用干细胞作为基因治疗的靶细胞；研究体内有效活化组织干细胞的方法，增强其功能。大规模细胞培养技术是细胞工程中重要的组成部分，是在人工条件下高密度大规模培养的用动、植物细胞来生产生物产品的技术。如今这一技术已广泛应用于现代生物制药的研究和生产中。它的应用大大减少了用于疾病预防、治疗和诊断的实验动物，为生产疫苗、细胞因子、生物产品乃至人造组织等产品提供了强有力的工具。根据细胞的生长特性可分为贴壁细胞和悬浮细胞，就其培养方法而言可概括为悬浮培养和固定化培养。就操作方式而言，可分为分批式、补料-分批或流加式、半连续式、连续和灌流式四种操作方式。大规模培养技术的建立是生产各种生物制品得到了很大的发展，例如单克隆抗体、红细胞生成素、疫苗和病毒杀虫剂等。 细胞工程的历史可以追溯到19 世纪，最早的探索从动植物组织培养开始的。 1885 年，卢克斯（Roux）发现鸡的神经细胞在温的生理盐水中可以存活，并使用了“组织培养”一词。 1903年Jolly，1906年Beebe等发明了盖片悬滴培养1907年，美国生物学家哈里森（Harrison）从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪神经组织存活了几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维，开创了动物组织培养的先河。与此同时，开始创建盖片凹玻璃悬滴培养法1937 年，荷兰植物学家温特（Went）发现B 族维生素和生长素对植物根的生长具有促进作用。1937—1938 年，法国科学家高特里特（Gautheret）和诺比考特（Nobercourt）几乎同时离体培养了胡萝卜组织，并使细胞成功增殖。因此，温特（Went）、高特里特（Gautheret）和诺比考特（Nobercourt）一起成为植物组织培养的奠基人。 1965 年，德偌贝提斯（Derobetis）将其编著的“普通生物学”改为“细胞生物学”是细胞生物学诞生的一个标志。分子生物学、细胞生物学等学科的发展为细胞工程诞生提供了理论基础。随着动植物组织培养、细胞融合技术的不断完善，以及在细胞核移植、动物克隆、三倍体育种、体外受精等方面的尝试，最终推动了20 世纪70 年代前后细胞工程这门新兴学科的形成。??? ?细胞培养指从生物机体取出部分组织分散成单个细胞或直接从机体取出单个细胞，也可把体外培养细胞分散成单个细胞在体外条件下培养，细胞能继续存活与增殖。培养过程中细胞不再形成组织。????