TiM-3信号通路在小鼠实验性结肠炎中作用.pdfVIP

一 塑 ．燮燮 摘要 背景与目的： 炎症性肠病(IBD)的病因和发病机制目前尚不清楚，但已明确Th免疫反 应和Toll样受体(TLR)信号通路异常在其中起着重要作用，并且这些异常在不 同类型的IBD(UC和CD)qb有所不同，但它们具体的调控机制迄今仍不是很明 确。Tim一3信号通路是新发现的调节Th免疫反应的核心环节，并且与TLRs信 号通路有密切关系。然而Tim．3信号通路在IBD发生发展中的作用，及它与IBD 的Th免疫反应和TLRs信号通路变化的关系目前尚不清楚。为此，本研究在体 内不同类型小鼠实验性结肠炎模型(分别类似人类的UC及CD的动物模型)中 它为干预靶点，观察干预Tim．3信号通路对不同类型IBD的TLRS信号通路和 Treg的影响，及其与疾病的的关系，从一新的角度探讨IBD的发病机制，为IBD 的防治提供新的靶点和方向。 方法： 预处理小鼠；每组内再分别分为：①对照组，②DSS模型组，③TNBS模型组。 2．IBD模型的建立： 饮用5％DSS溶液7天，建立小鼠急性结肠炎模型。对照组只饮用清洁饮用水。 禁食、不禁饮24小时后，乙醚麻醉，用3．5F导管从肛门插入肠道深约5．5cm， 60秒。7天后处死小鼠。 (3)小鼠Tim．3信号通路的干预：小鼠建模前12h腹腔内注射10011 g抗．Fc 11 mAb腹腔注射，对照小鼠给予 抗体消除非特异性吸附，再给予100 g抗．Tim．3 同等剂量的IgGl。 3．各项指标的观察和检测： ①观察各组小鼠每天体重、疾病活动指数DAI的变化； 摘要 一● ．一———————————————————————————————————————————————一 ②肉眼观察小鼠结肠大体形态的改变，HE染色观察小鼠结肠病理组织学改变； (DWestem TLR4、SIGIRR蛋白的表达： p65的表达。 结果： (1)小鼠体重及DAI积分变化 ①无论是在Tim-3抗体未处理组还是处理组，对照组小鼠体重呈持续上升状 态，模型组小鼠在造模后体重开始下降j在实验第5天各组体重均下降至最低 点，随后逐渐回升。在实验第5、7天各模型组小鼠体重下降百分比均明显高于 的各模型组体重下降百分比均低于未处理组，在第7天的TNBS组有统计学意 义(P0．05)，其他组间差异均无统计学意义(P0．05)。 ②各组小鼠DAI积分在实验第5、7天都有显著差异，无论是在Tim一3抗体 未处理组还是处理组，各模型组显著高于相应对照组(P0．01)，不同．模型组之 间比较无差异(P0．05)；Tim．3抗体预处理的各模型组DAI积分均低于未处理 组，在第7天的TNBS组有差异(P0．05)，其他组间差异均无统计学意义 (P0．05)。 (2)小鼠结肠病理学改变 ①小鼠结肠黏膜大体形态：无论是在Tim．3抗体未处理组还是处理组，对照 组小鼠结肠黏膜未见充血、出血、水肿、糜烂、溃疡，DSS及TNBS组可见结 肠黏膜有较明显充血、水肿、糜烂、溃疡；Tim．3抗体预处理的各模型组结肠黏 膜充血、水肿和糜烂较未处理组稍有减轻。 ②HE染色观察各组小鼠的肠道病理组织学变化，无论是在Tim．3抗体未处 理组还是处理组，DSS及TNBS组小鼠的结肠炎症程度、病变深度及隐窝破坏程 抗体预处理小鼠，无论是TNBS组还是DSS组，病理组织学损伤均显著低于未 处理小鼠(P0．01)。 (3)小鼠结肠黏膜Tim．3蛋白表达 无论Tim．3抗体处理与否，各组问小鼠肠黏膜Tim．3蛋白的表达无差异 (P0．05)；Tim．3抗体预处理小鼠，各模型组Tim．3蛋白的表达高于未处理小 摘要 鼠，但无统计学意义(PO．05)。 (4)小鼠结肠黏膜Tim．1蛋白表达 Tim一3抗体预处理各模型组Tim．1蛋白表达均低于未处理组，