溃疡病菌诱导下毛白杨防御相关基因的应答反应.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiAsh．Sci．2014，42(12)：3555—3558，3575 责任编辑 陈玉敏 责任校对 李岩 溃疡病菌诱导下毛 白杨防御相关基因的应答反应 张秀英 ，宋瑞清 ，理永霞，吕全 ，刘振宇4，张星耀 (1．东北林业大学林学院，黑龙江哈尔滨150040；2．长春工业大 学化学与生命科学学院，吉林长春 130000；3．中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所 ，北京 100091；4．山东农业大学植物保护学院，山东 泰安 271000) 摘要 [目的]研究溃疡病菌诱导下毛白杨防御相关基 因的应答反应。[方法]以毛白杨为试验材料 ，用溃疡病菌对7月龄幼苗进行接 种，提取诱导前后的毛白杨树皮mRNA，通过反转录生成cDNA，构建72h差异表达的SSH—cDNA文库。随机挑选 199个阳性克隆进行 测序，将测序结果与NCBI基因库中序列进行比较 ，并对这些EST在dbEST数据库进行同源检索分析，利用RT—qPCR对文库 中7个基因 进行进一步分析。[结果]172个EST找到 了同源序列，其中有32个序列与防御相关。在毛白杨受到溃疡病菌诱导时，这些防御基因的 表达量明显上升。[结论]该研究为开展毛白杨抗溃疡病重要功能基因的克隆和鉴定奠定了基础。 关键词 毛白杨；葡萄座腔菌；防御相关基因；抑制性消减cDNA文库；实时荧光定量PCR 中图分类号 S763．13 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2014)l2—03555—04 ResponseofDefense．relatedGenesofPopulustomentosa InducedbyBotryosphaeria dothidea ZHANG X-u-ying，ZHANGXing-yaoetal (SchoolofForestry，NortheastForestryUniversity，Harbin，Heilongjiang150040) Abstract [0biective]T0studytheresponseofdefense—relatedgenesofPopulustomentosainducedbyBotryosphaeriadothidea．1Methods】 TotalRNAwasextractedfrom thebarkofPopulustomentosabeforeandafterinoculationbyBotryosphaeriadothidea．BarksutRNAwerepuri— fledandtranscribedintocDNA．Constructedapoplar—pathogeninteractioncDNA libraryrfom fungusinoculatedpoplarbark72hpost—inocula— tion(hpi)，randomlyselected199positivecloning．Selectedunisequencesdefense—related，andfurtheranalysisbyquantitativereal—timePCR (qRT—PCR)．[Results]172ESTsequencesshowedhomologytosequenceswithassignedputativeidentityinpublicdatabases，including32 sequencesassociatedwithdefense—relatedgenes．IConclusion]TheexpressionofthesegeneswassignificantlyincreasedinPopulustomentosa inducedbyBotryosphaeriadothidea．ItiSexpectedthatthisstudywilllaycertain~undationforcloningofmajorgenesofPopulustomentosa havingfunction ofresistingBotryosphaeriadothidea． Keywords Populustomentosa；Botryosphaeriadothidea；Defense—relatedgenes；SSHcDNAlibrary；RealTimePCR (qRT—PCR) 杨树溃疡病是一种慢性病，主要危害树干，分布广泛，严