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北极海泥菌群的分离鉴定及生物学特性的初步研究 2013.12.19 实验目的 1 材料与方法 1.2 菌体的分离 1.3 细菌鉴定 生理生化试验结果 生理生化试验结果表明： 其耐盐的能力强 有多株细株细菌产低温酶类: N014产淀粉酶, R151产明胶酶, P371产纤维素酶 大多为革兰氏阴性细菌 1.3 细菌鉴定 温度生长实验结论 N011、P371、P372为耐冷菌 P231、R151、R152、N013、N014为嗜 冷菌 1.3 细菌鉴定 P231与Colwellia rossensis的16SrDNA序列有较高的同源 性, 其中与Colwellia sp. EM0379有98.8%的同源性 R151与Psychrobacter frigidicola的16SrDNA序列有较高 的同源性, 其中与Psychrobacter celler strain 23有98.9%的同源性 R152与Marinobacter guineae的16SrDNA序列有较高的同源性,其中与Marinobacter sp. BSi20018有99.2%的同源性 N013与Pibocella ponti 的16SrDNA序列有较高的同 源性, 其中与Pibocella sp. MOLA312有99.7%的同源 性 N014与Marinobacter segnicrescens的16SrDNA序 列有较高的同源性, 其中与Marinobacter sp. ANT8277 有99.2%的同源性 系统发育分析结果 五株嗜冷菌的进化树可以确定 P231属于科尔维尔氏菌属( Colwellia) R151属于嗜冷杆菌属(Psychrobacter) R152属于海杆菌属(Marinobacter) N013属于极地杆菌属( Pibocella) N014属于海杆菌属(Marinobacter) 讨论 低温酶具有诸多优势是研究的热点 淀粉酶在食品、医药、洗涤、造纸、纺织方面有着非常广泛的应用前景 明胶酶在肿瘤抑制、脱色工艺上有着良好作用 纤维素酶在食品、洗涤方面的应用广泛 以上均表明对该三株产酶菌的研究具有重大意义,低温酶的研究也会越来越重要 Thank you! * * 通过分离鉴定，建立整个系统发育树有助于了解整个系统的多样性 二、促进对极地微生物抗冻物质、多不饱和酸、抗紫外辐射、 耐盐机制、抗肿瘤、新型药物的研究与应用 1.1 供试海泥的获得 采集自北极海域的海洋沉积物样品 B12( 2024m)、N01( 3333m)、 P23( 2028m)、R15( 1732m)、P37( 2216m)。 用到的培养基：2216E海洋细菌培养基:蛋白胨5g、酵母粉1g、柠檬酸铁0.1g、琼脂18g、陈海水1000mL、pH8。 方法：样品稀释后涂布到2216E培养基上，4℃倒置培养7d以后挑取不同菌落划线在2216E培养基上纯化后保种转入-80℃保存 1.3.1 形态观察和生理生化试验 1.3.2 温度生长试验 将8株菌接入2216E培养基分别放到4 ℃、15 ℃ 、28 ℃ 培养箱培养10d左右,观察生长状况 1.3.3基因组DNA的提取和16SrDNA系统发育分析 扩增16SrDNA采用的正向和反向引物为27F和1492R, 使用Taq聚合酶进行测序后进行核酸序列比对 科尔维尔氏菌属 嗜冷杆菌属 海杆菌属 极地杆菌属 海杆菌属 *
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