表面改性双相陶瓷复合自体骨髓干细胞修复兔骨缺损实验的研究.pdfVIP

表面改性双相陶瓷复合自体骨髓干细胞修复兔骨缺 损的实验研究 王光军，张娇，章庆国 东南大学附属中大医院整形外科，江苏南京（210009 ） E-mail ：plastic135@126.com 摘 要： 目的 应用自体骨髓基质干细胞(BMSCs)复合经低晶态羟基磷灰石（LcHA ）涂层 的双相陶瓷(BCP)构建的组织工程化骨（LcBCP ）,修复兔桡骨节段性缺损。方法 体外分离 培养、诱导扩增兔BMSCs,取第三代细胞复合LcBCP （BMSCs- LcBCP ，实验组）后修复15 只兔左侧桡骨15mm缺损；右侧桡骨缺损处植入复合BMSCs的双相陶瓷(BMSCs-BCP)作为对 照组,于植入后4 、8和12周处死动物，通过大体形态、组织学、影像学和扫描电镜检测骨缺 损修复效果。结果 BMSCs- LcBCP复合物生长良好,随时间延长,X线显示实验组连接处骨痂 形成,实验对照组连接处始终愈合稍差,12周大体观察实验组骨修复良好,髓腔再通；组织学显 示板层骨形成,连接处骨性愈合,实验对照组连接处虽然也为骨性愈合，但尚有较多编织骨形 成。结论 自体BMSCs复合LcBCP形成的组织工程化骨可修复兔桡骨节段性缺损,低晶态羟 基磷灰石涂层能够增强双相陶瓷的早期成骨。 关键词：骨髓间充质干细胞；低晶态羟基磷灰石；双相陶瓷；骨缺损 近年来运用组织工程方法修复骨缺损的文献报导很多，其中羟基磷灰石和人体骨及牙 齿中主要矿物质相类似的化学组成和晶体结构，是人体骨骼的主要无机质成分，也是目前 研究最多的生物活性材料之一 [1] 。低晶态HA （结晶度为5% ）对于成骨活动是有益的，可 以刺激骨的生长，作为一种生物转化的等价物，是一个必要的准备阶段，在成骨细胞和破 【】 骨细胞之间起中介作用 2 ，从而加速成骨作用。我们运用低晶态HA 涂覆双相陶瓷（β-磷酸 三钙和羟基磷灰石）基体，作为双相陶瓷涂层并复合 BMSCs 植入兔桡骨缺损，观察 BCP 表面改性后成骨作用的变化，从而为运用低晶态HA 作为涂层材料提供科学基础。 1 材料和方法 1.1 材料 多孔BCP 和低晶态涂层的多孔BCP （东南大学功能材料研究所提供），BCP 中β-TCP 和HA 之比为30：70，低晶态HA 通过浸泡和烧结涂覆在基体表面，涂层厚度50um,两组材 料规格均为 15.0mm×4.0mm 大小圆柱体，各制作 15 个，所有制作好的材料经钴60 照射消 毒备用。 1.2 原代和传代骨髓基质干细胞的培养和诱导[3] 无菌条件下抽取兔髂骨髓以淋巴细胞分离液作密度梯度离心，取中间白色云雾状细胞 层，离心清洗，加完全培养基置于 50ml 培养瓶，置于 370C、5 ％CO 、饱和湿度的培养箱 2 中培养，据细胞生长情况及培养液颜色确定换液时间。待细胞长满瓶底70 ％～80%时传代。 自第二代细胞传代后应用加入地塞米松（10 nmol/L）、β-甘油磷酸钠（10 mmol/L）、抗坏血 酸（50 µg/ml0 ）的标准DMEM 培养液行成骨诱导，取第三代细胞消化、离心，收集细胞， 以每毫升体积5×106 个细胞浓度与材料复合，体外培养六天后，备动物模型制作之用。 1.3 动物分组 取30 只健康成年灰兔，体重2.5~2.8kg，雌雄不限，随机选其中15 只兔，共30 侧桡骨， -1- 手术造成骨缺损。实验分为实验组(LcBCP 组) ：为每只兔左侧桡骨缺损15 侧，以复合BMSCs 的LcBCP 植入；对照组（BCP 组）：为每只兔右侧桡骨缺损15 侧，以复合BMSCs 的BCP 植入；空白组：另随机选择2 只兔，手术造成单侧骨缺损，不植入任何材料。 1.4 手术方法