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中国科学 C 辑 生命科学 2005, 35 (5): 389~397 389
棉花半乳糖苷酶基因启动子的分离
及其在转基因烟草中的表达*
吴蔼民 刘进元**
(分子生物学实验室及教育部蛋白质科学重点实验室 清华大学生物科学与技术系, 北京 100084)
摘要 β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, EC 3) 由植物中广泛分布的一类糖基水解酶组成,
被认为与细胞壁多糖的代谢相关. 棉花(Gossypium hirsutum) β-半乳糖苷酶基因已被成功分离, 被
命名为GhGal1. RNA杂交实验显示该基因在棉花纤维发育的伸长期优势表达. 为了分析GhGal1
基因的时空表达调控, 本研究构建了GhGal1 启动子区域(1770 bp) 与β- 葡糖醛酸糖苷酶
(glucuronidase, GUS)基因融合的双元载体, 通过农杆菌转化烟草植株. 对转基因植株分析的结果
表明: 此转基因果实中的GUS活性比阴性和阳性对照的活性高. GUS组织定位分析表明: β-半乳
糖苷酶基因能在根组织的分生区、子叶、维管束组织、果实和表皮毛中表达. 此外, 调控区域的
序列分析揭示该序列含有一些果实/种子特异表达以及与表皮毛表达相关的保守元件. 这些结果
显示了GhGal1 启动子在转基因烟草植株中的时空表达特征, 并提供了GhGal1 基因参与棉花纤维
发育的一些重要线索.
关键词 棉花 β半乳糖苷酶 转基因烟草 启动子活性 果实及表皮毛表达
β-半乳糖苷酶(GUS, EC 3)广泛分布于微生 纤维延长[6] 的生理代谢过程, 其作用被解释为: 为快
物、植物和动物中, 具有水解β-D-半乳糖苷的末端非 速生长释放储存的能量(如种子储存能量移动中寡糖
还原性β-D-半乳糖残基的特征. 到目前为止, 已经从 与多糖的消耗), 在正常的半乳糖脂、糖蛋白和细胞
相关基因或cDNA序列推断出超过 100 种β-半乳糖苷 壁组分的新陈代谢循环中为细胞的伸长而释放游离的
酶的一级结构, 其中的一些得到了提纯及特征分析. 半乳糖, 在衰老过程中降解细胞壁组分[3,7~11]. β-半乳
有证据表明此酶在植物中涉及一系列包括果实成 糖苷酶能去除成熟果实细胞壁成分中末端非还原性
[1,2] [3] [4] [5]
熟 、种子萌发 、花粉管生长 、花器官衰老 和 β-D-半乳糖残基的事实, 已在苹果、烟草、梨子、鳄
2005-05-17 收稿, 2005-08-23 收修改稿
* 国家重点基础研究发展计划(批准号: 2004CB117303)和高技术研究发展计划(批准号: 2004AA222100, 2002AA212051 和 2002AA207006)
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