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实验八-土壤中微生物的分离 实验原理 土壤是微生物生活的大本营 细菌数亿/g土壤，土壤中的细菌总重量估计为：10034 × 10 12 吨； 根据某微生物的生长条件（营养,酸碱度，温度,氧气等）而供给它适宜的培养条件, 或加入某种抑制剂造成只利于某种菌的生长, 而抑制其他菌的生长; 用稀释涂布平板法获得单菌落（并不能绝对保证是纯培养，需要结合观察其菌落特征、个体特征，进一步分离纯化）; 实验目的 熟悉常用微生物培养基; 掌握利用平板分离法从土壤中分离微生物的基本操作; 认识土壤环境中微生物的多样性。 实验步骤 将10g土样装入含90ml无菌水的锥形瓶中振荡20min 取1ml迅速移入含9ml无菌水的试管中，吹吸均匀，为稀释10倍的样品 依次进行梯度稀释 涂布合适稀释度的样品0.1ml于已经倒好冷却的相应的培养基上，倒置培养 实验安排 10-610-710-8稀释度为细菌培养 10-410-510-6 稀释度为放线菌培养 10-210-310-4稀释度为真菌培养 菌落计数 ： 每克含菌样品中细菌/放线菌/真菌 活细胞数＝ （同一稀释度平板上菌落平均数× 10×稀释倍数× 10 ） 含菌样品克数 平板：5X45=225 1毫升吸管：5X9=45 涂布棒：5X3=15 * 微生物的分离及稀释平板法 计数 （1）倾注平板法 (混合平板法) （2）涂布平板法 菌落计数 稀释到适量浓度 倾注或涂布平板 培养 采用培养平板计数法要求操作熟练 、准确，否则难以得到正确的结果： 样品充分混匀； 每支移液管及涂布棒只能接触一个 稀释度的菌液； 同一稀释度三个以上重复,取平均值； 每个平板上的菌落数目合适，便于 准确计数； 一个菌落可能是多个细胞一起形成，所以在科研中一般用 菌落形成单位（colony forming units， CFU）来表示，而 不是直接表示为细胞数。 真菌 放线菌 平均 3 2 1 平均 3 2 1 平均 3 2 1 细菌 平板中的CFU数 10-6 10-5 10-4 稀释度 观察结果：下星期三下午 *
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