Kupffer 细胞 分离 培养.pptVIP

肝脏细胞悬液制备 门静脉穿刺，以10ml／min流量经门静脉灌注PBS ，直至肝脏呈黄白色，总量约20ml。再用20ml 0.05％的Ⅳ型胶原酶溶液(sigma ，PBS液稀释)门静脉灌注(小鼠不用此步骤）。 取下肝脏加入20ml 0.05％胶原酶，37 oC孵育40 min，经200目细胞筛过滤。 PBS稀释至50ml, 300×g 5 min，4oC，离心洗涤2次，取沉淀PBS稀释至50ml，用50g×g 3min, 4oC离心，弃沉淀，将上清液以300×g，5min, 4oC离心，取沉淀。 用镊子划碎肝组织 装入试管消化 肝脏消化吹打后细胞悬液 细胞悬液过滤 洗涤与肝细胞沉淀 梯度离心 Percoll原液9份加入1份PBS（10倍浓度）配成100%的SIP。 取4支无菌离心管，沿着管壁加入2 mL 50％的SIP，然后倾斜（60o）试管，轻轻的沿着管加2mL25％的SIP细胞悬液（小鼠2管，大鼠4管）。 500×g，离心15 min，4oC， 50％的SIP和25％的SIP层面之间有一层白色物，吸管轻轻的吸取之，置离心管中，用PBS离心清洗2遍，弃上清(300×g，5min)。 非肝细胞SIP离心准备