推进早期胚胎发育正常调控过渡的输卵管细胞因子的初步研究.pdfVIP

维普资讯 }豁 } q}一 甲 ‘一 ／ 动 物 学 研 究 1997，18(1)：85— 2 CN 53--1040／Q ISSN 0254—5853 ZoologicalResearch 推进早期胚胎发育正常调控过渡的输卯管 细胞因子的初步研究 经糖苷酶消化，第 3组 ROPs显著地降解为分子量接近 30kD的蛋 白。利用制备的抗总 ROPs多抗 (AropT)以及针对不同分子量 ROP的抗血清 (Arop I、Arop Ⅱ和 Arop II[)，分别进行功能分析发现，AtopT和Arop I能使受精卵发育完全阻断；Arop Ⅱ阻断 受精卵发育的百分率为 75％；AropⅢ无特异性地阻断受精卵发育的作用。结合我们已报遭 的研究结果，推测ROP 68和ROP55就是具备启动早期旺胎合子型基因开放、实现正常发 育调控过渡功能的输卵管细胞因子 l、 关键诃 输卵管细胞因子 功能撕 早 滞 氧． 多细胞生物的发育依赖于细胞问的通讯联络，其媒介物之一就是细胞因子，它们对于 细胞的生长、分裂、分化以及一些其它生命活动过程起着重要又关键的作用。自从本世纪 3O年代 Rich等首次提出由细胞衍生的一些因子可能具有介导某些生物功能的概念之后， 已经鉴别出各种各样的细胞因子，诸如淋巴因子、单核因子以及各类已知的生长因子等 (Oppenhein 1994)。在胚胎发育各个时期所依赖的各类细胞因子及其作用，也正在被逐 步揭示。 众所周知，受精后的哺乳类早期胚胎，其最初的发育是受母型基因控制的，即由源自 卵球的mRNAs和蛋白质调控的；发育至一定时期才转由胚胎自身的合子型基因组控 制。由母型向合子型调控的顺利过渡是早期胚胎进一步正常发育的必要内在条件，而正常 的调控过渡得依赖于外源信号 (细胞因子)的刺激，否则早期胚胎细胞就停顿在细胞周期 的G 相．发生所谓的早期发育阻滞 (李逸平等，1992，1993；Richter，1991)。 我们过去的研究发现，源自输卵管上皮细胞的因子在实现早期胚胎发育正常调控过渡 中起着重要作用，且无种的特异性 (李逸平等，1993) 尽管有些报道涉及一些哺乳动物 输卵管合成，分泌的蛋白，然而对于这些蛋白的生化特征，尤其是它们的生物学意义仍未 国家自然科学基金厦上海市青年科技启明星计划资助项目 本置于 1995年 l0月8日收到、1996年1月3日修回 维普资讯 x 物 料 宄 18巷 追究 tMcrmillod等，】993；Naiicttrrow等，1994) 本研究对兔输卵管J-皮细胞分泌蛋白的理化特性及其促发育的生物活性进行j分析、 为揭示哺乳类早期胚胎细胞周期的G 相启动信号． 解由母型基因调控向台子型基因组 调控的发育过渡机制奠定基础。 I 材料与方法 1．I 兔输卯管上皮细胞 (ROEC)及其条件培养液的获取 选择黄体期、体重约4kg的雌性新西兰兔，经自然发情、交配后 17h处死．取其输 卵管，PBS冲洗管腔；用镊子挤压输卵管．使管腔内输卵臂粘膜表层 卜皮细胞外逸。反 复吹打，分散细胞。加入 1mlHAM F l0无血清无蛋白培养液 (GIBCO)．制成 ROEC悬滴．置于 24孔培养板 (Falcon)内 (每孔300 1．细胞数为 1×10,／／1n1)，于 37c含5％CO 的CO 培养箱内培养。经48h培养后，收集其培养液．经2000r min 离心，取上清液．即为 ROEC条件培养液。取 10t*lROEC条件培养液．参照Bradford (1976)方法，以BSA为标准，估量 ROEC条件培养液中总蛋白的含量约为500,zig JT】1。 j ． 2 ROEC分泌蛋白的放射性同位素掺入及浓缩 取 100 lROEC的悬液转移到250 I含 150pcJ