出口食品中偶氮甲酰胺的测定方法+高效液相色谱法-编制说明.doc

《编制说明标准制定的任务来源及意义 1、任务来源 本标准的制定工作，是按照国家认证认可监督管理委员会国家认监委关于下达2012年第五批出入境检验检疫行业标准制(修)订计划项目的通知》下达的任务而进行的，项目编号为2012B443，项目名称为《》，由负责起草。技术归口单位为。2、制定标准的意义偶氮甲酰胺（Azodicarbonamide, ADC，C2H4O2N4），又名偶氮二甲酰胺，早期是一种用于生产聚乙烯材料的发泡剂，由于其具有漂白、氧化和明显强化面筋作用以及高效、价廉等优点，在美国、加拿大、中国等国家，替代溴酸钾作面团性能改进剂和增白剂[1-3]。 研究表明，偶氮甲酰胺作为面粉添加剂存在较大的食品安全隐患。早在2003年，欧洲食品安全局（EFSA）发布的风险评估报告中称：金属盖用塑料垫片的发泡剂偶氮甲酰胺，会在金属盖高温处理的过程中产生氨基脲这种致癌物质而残留于食品中[4-5]。偶氮甲酰胺在面粉类食品加工过程中经过湿热处理，同样会降解生成氨基脲残留于面粉制品中，会对人体产生危害[6-7]。偶氮甲酰胺本身具有一定的毒性，会损害呼吸系统和导致皮肤过敏因此，美国、加拿大等国家我国GB 2760-2011《食品添加剂使用卫生标准》规定小麦粉中ADC最大使用量为45 mg/kg [8]，但至今还没有制定相应的检测标准。 目前，面粉中偶氮甲酰胺的检测方法主要有高效液相色谱法（HPLC）[9-14]。前处理方法主要有直接提取[9-12]和经过衍生化之后[13-14] ，测定偶氮甲酰胺的含量。Bechtold[13] 和Weak[14] 试验中，将偶氮甲酰胺经衍生化后再进行测定，但前处理过程繁琐，操作复杂。偶氮甲酰胺为极性较强的物质，且溶解性较差，前处理过程中甲醇、乙腈等有机溶剂均难以提取，很难选取一种合适的有机溶剂既能增加其提取效率，又不干扰HPLC法的测定。本文采用固体标准品添加，丙酮提取，基质回收曲线定量，解决了偶氮甲酰胺因提取效果差而导致回收率低的问题。该方法简便快速，测定结果准确可靠，并具有良好的精密度和较宽的线性范围，适用于日常面粉中偶氮甲酰胺的含量监控对于提高我国面粉类食品安全监控能力，打破国外技术性贸易壁垒，促进对外经济的发展，建立适合我国国情的面粉食品安全技术保障体系等诸多方面起到积极重要的作用和奠定下坚实的基础。 二、编制依据 本标准的编制遵循GB/T 1.1-200《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则》和GB/T 20001.4-2001《标准编写规则 第4部分：化学分析方法》的要求进行编写制订的。收到认监委的任务下达文件后，成立了标准起草小组，第一起草人任组长，对小组成员进行了分工并制定了时间进度表。本标准起草通过查询相关资料和文献，建立了方法经实验研究验证后，方法的灵敏度能满足的要求。2012.12 ~2013.1 查阅相关文献资料，购买标准品或样品；。四、主要试验技术论证条件的优化（1）检测波长的选择 采用高效液相色谱-紫外检测器进行分析时，选取目标化合物的最大吸收波长，能够提高其检测灵敏度，同时还能减少杂质的干扰。文献报道[]，ADC的检测波长主要有245 nm、275 nm和260 nm。本实验对ADC标准品溶液进行紫外光谱扫描，结果显示，最大吸收波长为245 nm，因此，本实验采用245 nm为ADC检测波长。 （2）液相色谱柱的选择 文献报道，ADC的液相色谱分离主要采用C18柱[]和氰基柱[]，本实验对XDB-C18、SB-C18柱、AQ-C18亲水柱、氰基柱和氨基柱等进行了考察。结果表明，由于ADC极性较强，SB-C18柱、AQ-C18亲水柱、氰基柱和氨基柱等柱子对其保留效果均不是很理想，尝试加入庚烷磺酸钠、十二烷基磺酸钠等离子对试剂，保留时间始终在2～3 min之间，都没有能够改善其保留性能从而推迟出峰时间。虽然氰基柱对比其他柱子，保留时间相对较长，但在ADC右侧有杂质峰，且难以消除，会干扰其测定。采用XDB-C18对ADC进行分离，不仅没有杂质峰的干扰，且保留时间在3～4 min之间，满足分析需要。 （3）流动相的选择 本实验对乙腈-水、乙腈-乙酸铵和0.02% K2HPO4(pH=2.4) 三种流动相体系进行了考察。结果表明，以乙腈-水为流动相时，虽然标准溶液能够出峰，但进行添加回收试验时，调节流动相比列，或者进行梯度洗脱，与空白对照相比，发现目标峰都无法与杂质峰分开，严重干扰测定。而以乙腈-乙酸铵为流动相时，等度或梯度洗脱，目标峰右侧均有一个杂质峰，且ADC添加浓度越高，杂质峰峰面积越大，会干扰测定。参照文献[]，采用0.02% K2HPO4(pH=2.4)为流动相时，ADC的色谱峰峰型对称，且与基质中的杂质能够很好的分离。因此，本实验采用0.02% K2HPO4(pH=