酸性植酸酶基因的克隆及其在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达.pdfVIP

酸性植酸酶基因的克隆及其在大肠 杆菌和毕赤酵母中的表达 摘要 植酸酶是一种新型的可作为动物饲料添加剂的重要酶制剂，是一种能水解植 酸的磷酸酶类，在动物饲料中富含磷的谷物、豆类和油料等作物中．磷的基本贮 存形式是植酸磷，因单胃动物体内缺少能分解植酸的酶很难利用这些植酸中的 磷，其利用率极低。植酸酶对提高饲料中磷的利用率以及减轻因动物高磷粪便所 导致的环境污染有很大的作用。 植酸酶主要来自于植物和微生物，来源于植物的植酸酶均属于6一植酸酶， 最适pH范围在5．0—7．5，不适合在单胃动物中起作用的，而且在植物中含量极 低，因此植酸酶的研究方向转向最适pH值为酸佳、酶含量较高的丝挠真菌。 本实验成功从丝状真菌中提取出总DNA，通过PcR扩增。将此酸性植 酸酶全基因通过pPIc9Kvector转化酵母细胞，提取酵母转化子基因组 进行PcR验证，结果表明外源基因整合到了酵母的染色体上， 提取未降解的、不含DNA与其他杂质的RNA是进行分子克隆和基因表达分 析等研究的基础。由于复杂的细胞壁和内源酶活性的存在，所以要从丝状真菌中 提取和纯化出有生物活性的RNA比较困难。为获得高质量的RNA，本实验比较 三种不同的提取方法，得出热硼酸法适合于富含Rnase和多糖的丝状真菌的RNA 的提取，该方法可得到完楚、均一的RNA样品，并且得到的RNA可用于RT|PcR 等分子生物学实验操作。 本实验以丝状真菌黑曲霉的总cDNA为模板，通过PcR方法扩增到理想大小 转化大肠杆菌DH5o，在温度诱导下，该基因在大肠杆菌中得到了表达， 为2．5．最适反应温度为55℃。 毕赤酵母 n M01ecularand ofAcid C10ningExpression E in cD』j Phosphotase gene Abstract isa asanimalfeed Phytase new—type enzyme importantproduct can acid． in additives，which catalyzephytic PhosphoruspresentedcrDps as such beans， isintheformof grains， oil—bearingcrops phytate— rateof utilization in phosphorus．The phosphorusphytatebymonogastric was the animals 10wbecauseof of wi very lack th is j aneffectiVetoincreaseutilzationrate phytase way