纳米纤维固相萃取柱萃取-高效液相荧光法分析头发皮质醇 Nanofibers Solid Phase Extraction Column for Determination of Cortisol in Hair Samples.pdfVIP

第40卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第1期 ChineseJournalof 124～128 2012年1月 AnalyticalChemistry 纳米纤维固相萃取柱萃取一高效液相荧光法分析头发皮质醇 陈利琴， 康学军q’2 晏嫣1 顾忠泽2 陆祖宏1 -(东南大学儿童发展与学习科学教育部重点实验室，南京210096) 2(东南大学苏州研究院苏州市环境与生物安全重点实验室，苏州215123) 摘要采用基于纳米纤维同相萃取的高效液相色谱一荧光测定(HPLC-FIu)法测定头发中的皮质醇水平。 以新型纳米纤维萃取柱(PFSPE)提取头发样本浸出液，用100ttL乙醇洗脱，再加入230ttL浓H：SO。反应 2rain，反应物加水混合后用PFSPE柱提取，最后用50¨L甲醇直接洗脱后注入色谱体系进行分析。此方法的 检出限为0．05 ng／g(S／N=3)，日内精密度和日间精密度分别低于6．8％和8．9％，平均方法回收率为88．9％。本 方法提取过程简便、快速、环保，而且可以准确测定头发样本中的皮质醇水平。 关键词 纳米纤维；头发；皮质醇；皮质酮；高效液相色谱；荧光检测 1 引 言 在精神生物学研究中，皮质醇(啮齿类动物是皮质酮)是一种非常重要的激素，它被称为“压力荷尔 蒙”，人体面临生理、心理刺激时，其分泌量增高(应激反应)“】。目前研究中采用的血液、唾液、尿液等样 本测试皮质醇的水平，只能反映应激及时变化或一定时间内的累积情况。而对于研究对象一段时间(数 月以上)的应激情况进行了解，就可以采用头发这种生物样本。研究证实，头发能够反映人体长期的摄药 信息(．--I以追溯到几个月之前)，头发皮质醇是一种很好的研究长期下丘脑一垂体一肾上腺轴(HPA轴)活性的 工具，可以客观测量慢性应激f2]。Pereg等[31指出，在诸多心梗发病征兆中，头发的皮质醇水平是判断发病风 险最明显的生物学标志物。采用头发基质，对于分析测试具有很多优势，如头发生长规律，为研究者提供 一种追溯性研究窗口；头发采样无创、简便、无需专业指导；头发样本可以室温储存等嘲。头发皮质醇分析 将成为生理学、精神医学、体育医学、认知科学、心理学等众多学科的重要研究手段。 目前，头发中皮质醇测定多采用放射免疫法14]、酶联免疫法陋1及LC—MS法【6】。免疫法灵敏度较高，能 够检测出头发中的痕量皮质醇，但存在交叉反应、测定结果偏高。各种商业性的免疫试剂盒测定的结果 差异性较高，试剂盒的成本也较昂贵。LC—MS法虽然准确灵敏，但需要昂贵的仪器，故一般实验室难以 普及。此外，还有HPLC—Flu法测定头发中皮质醇分布的报道[71，采用传统SPE和溶剂萃取的方法分别 提取头发浸出液和硫酸衍生产物。本研究优化改进了头发样本前处理操作，用本研究组建立的基于电 纺纳米纤维的固相萃取技术(Packed-fiber solid-phase 取步骤，省略了挥发提取溶剂浓缩目标物的操作，使热不稳定的目标物提取效率大大提高，同时使前处 理操作时间大大缩短、操作更为简便，实现了头发中皮质醇的高效灵敏检测。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 TOLEDO)；MM400冷冻混合型球磨仪(德国莱驰公司)； 沪西仪器厂)；ALl04-IC分析天平(METTLER HY-2调速多用振荡器(常州国华电器有限公司)；Xwy-0l型纳米纤维固相萃取柱(苏州先伟纳米技术有 限公司)。 201卜05-24收稿；2011—08-04接受 SYN201006．SG201028)和东南大学优秀博士论文基金资助 ’E-mail：xjkan964@163．oom 万方数据 第1期 陈利琴等：纳米纤维同相革取柱萃取高效液相荧光法分析头发皮质醇 I25 皮质醇(又名氧化可的松)和皮质酮标准品购自中国药品生物制品检定所；甲醇(色谱纯，山东禹王 化学品公司)，H：SO。、乙醇等其