苹果腐烂病菌拮抗放线菌筛选、鉴定及发酵条件优化.pdf

摘要 mali et 苹果腐烂病是由Valsa Yamada引起的一种真菌性病害。中国于 Miyable 成了严重的经济损失。随着化学农药引起的环境污染以及人们公认的3R(抗性、残 毒、再猖獗)问题的出现，利用自然环境中的拮抗微生物防治植物病害愈来愈受到人 们的重视。本文旨在从广东省中山市采集的土样中分离、筛选出对苹果腐烂病菌有 较强拮抗作用的放线菌，并对拮抗菌株进行初步鉴定及对其发酵条件进行研究，以 期为苹果腐烂病的防治提供新的解决方案。主要研究内容及结果如下： 1对从广东省采集的土样进行热处理及化学处理，以降低常规放线菌的出现几 率，然后通过稀释平板法对原土样及处理土样同时进行分离，共获得放线菌293株。 其中，未处理、热处理及苯酚处理的土样分离得到的菌株数量分别为214、22、57 株，试验结果表明，经过一定处理的土样分离得到菌株的数量明显减少，同时稀有 放线菌的数量可能有所增加。 2以苹果腐烂病菌为指示菌对分离菌株进行筛选，平板对峙法初筛得到有抑制 作用的菌株61株，其中抑菌率在50％以上的14株，占总数的4．78％；管碟法进一 步对拮抗效果明显的菌株进行复筛，试验数据表明，菌株Z．6的发酵滤液对苹果腐 烂病菌抑制作用最显著，抑菌圈直径达32．87 mill。为了测定该菌株对苹果腐烂病的 防治效果，本文还进行了苹果离体枝条防治效果试验，结果表明，该菌株的防治效 果达32．9％。 3采用插片培养的方法，以观察菌株的培养特征、形态特征尤其是孢子及孢子 丝的形态特征为主，生理生化特性、抑菌谱测定为辅的传统方法，初步鉴定菌株Z一6 为链霉菌属(Streptomycesspp．)的金色类群似ureus)。同时，抑菌谱测定结果表明，菌 株Z．6不仅对苹果腐烂病菌抑制效果明显，对其他16种供试病原真菌同样有一定 程度的抑制作用。尤其对小麦全蚀病菌、番茄灰霉病菌和稻瘟病菌效果明显，抑制 率均在70％以上。 4经平板对峙培养发现，苹果腐烂病菌生长缓慢，周围有红褐色物质产生，说 明菌株Z．6产生或分泌某种物质从而抑制病原菌的生长。挑取病原菌菌苔边缘菌丝 镜检，发现菌丝表现为念珠状、畸形、扭曲，顶端中空、膨胀，形成大量囊状体。 在发酵滤液对病原菌丝生长的测定中，菌株Z．6发酵原液基本完全抑制病原菌菌丝 的生长，其作用强度随无菌滤液稀释倍数的增加而减弱。稀释1000倍液时基本无 抑制作用。综上所述，菌株Z．6对病原菌的作用机理是产生抗菌物质直接破坏病原 菌菌丝正常生长。 5为了提高菌株Z-6抑茵活性物质的产量，增强其对苹果腐烂病菌的拮抗效果， 本文通过正交设计试验，对菌株Z．6的发酵培养基的成分及发酵条件进行优化。最 终确定培养基最佳配方为：葡萄糖35．5∥L，玉米粉30．O∥L，黄豆饼粉27．7∥L， 碳酸钙3．0 h， g／L，淀粉lO．0 g／L，氯化铵3．0叽：其最佳培养条件为：菌龄为120 mL(250 接种量4个(05mm)，发酵时间72 6．0，培养基装量80 h，培养基初始pH r／min。 mL三角瓶)，发酵温度28℃，摇床转速180 关键词：苹果腐烂病菌；拮抗放线菌分离；筛选；鉴定；拮抗机理：发酵条件 of Valsamaliin Screening,identification AntagonisticActinomycesAgainst Apple and oftheFermentationCondition O